显微镜观察药敏法检测结核分枝杆菌耐药性

临床肺科杂志２０１５年５月第２Ｏ卷第５期　８Ｏｌ　显微镜观察药敏法检测结核分枝杆菌耐药性　黄飞　陈俊林顾德林　【摘要】　目的评价显微镜观察药敏法（ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ，ＭＯＤＳ）检测结核分枝　杆菌临床分离株异烟肼（ＩＮＨ）和利福平（ＲＦＰ）耐药性的可行性。方法使用ＭＯＤＳ技术对本医院的共２０１　ＭＯＤＳ法检测平均　株结核菌临床分离株分别进行ＩＮＨ、ＲＦＰ的耐药性检测，并与罗氏比例法作比较。结果分别为９９．３％和１００％。结论时间为８ｄ，以罗氏比例法为金标准，ＩＮＨ的灵敏度和特异性分别为９８．５％和１００．Ｏ％，ＲＦＰ的灵敏度和特异性　ＭＯＤＳ法检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药性具有成本低、快捷、　操作简便、准确等优点，为结核耐药检测提供了一种较好的方法。　【关键词】显微镜观察药敏法；结核分枝杆菌；耐药性；异烟肼、利福平　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｍｙｅｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ＨＵＡＮＧ　Ｆｅｉ，ＣＨＥＮ　Ｊｕｎ—ｌｉｎ，ＧＵ　Ｄｅ—ｌｉｎ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅ　Ｓｉｘｔｈ　Ｐｅｏｐｌｅ　Ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｆＮａｎ—ｏ　ｔｏｎｇ，Ｎａｎｔｏｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｔｔ　２２６０１３，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ（ＭＯＤＳ）　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０１　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏ—　ｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｔｅｓｔ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｉｓｏｎｉａｚｉｄ（ＩＮＨ）ａｎｄ　ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ（ＲＦＰ）ｂｙ　ＭＯＤＳ　ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＭＯＤＳ　ａｓｓａｙ　ｗａｓ　８ｄ．Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｗｅｒｅ　９９．３％ａｎｄ　１００．０％ｆｏｒ　ｆｉｆａｍｐｉｃｉｎ．ａｎｄ　９６．６％ａｎｄ　１００％ｆｏｒ　ｉｓｏｎｉａｚｉｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ＭＯＤＳ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ａｄ－　ｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｌｏｗ　ｃｏｓｔ，ｒａｐｉｄｎｅｓｓ，ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ，ｓｉｍｐｌｙ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｈｉ　ｇｈ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　Ｍｙｃｏ—　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　ＭＯＤＳ；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ｉｓｏｎｉａｚｉｄ；ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ　耐药结核病的蔓延，已成为严重的公共卫生和　社会问题¨　，给结核病的防治带来了极大的困难。　质控株结核分枝杆菌Ｈ３７Ｒｖ，上海市肺科医院　提供。临床分离株首先用ＴＣＨ培养基和ＰＮＢ培养　基鉴定，得到２０１株结核分枝杆菌。培养基：７Ｈ９液　传统的结核药敏试验需要耗时４～８周，而一些自动　化的检测技术如ＢＡＣＴＥＣ　ＭＧＩＴ９６０检测系统虽然　明显缩短了时间，但是设备昂贵，不能在基层普及。　而ＭＯＤＳ法是一种通过痰液标本的液体培养，在镜　下检测细菌生长特性的方法　，本研究应用该方法　体培养基。异烟肼（ＩＮＨ）、利福平（ＲＦＰ）均为纯品，　上海信谊公司产品。异烟肼及利福平原液置一２０￣Ｃ　备用。仪器ＰＣＲ仪（Ｂｉｏ—ＲＡＤ）、倒置显微镜、９６孔　细胞培养板（上海肺科医院引进）。　检测２０１株临床分离结核杆菌对一线最重要抗结核　药物异烟肼（ＩＮＨ）和利福平（ＲＦＰ）的耐药性，并同　时采用比例法结果作为对照，探讨ＭＯＤＳ方法检测　结核菌耐药的可行性，结果报道如下。　资料与方法　一二、方法　１　罗氏培养基药敏比例法按照《结核病诊断　实验室检验规程》　进行，每种药各接种２支含药　培养基和２支对照培养基，接种菌液量分别为１０　ｍｇ和１０～ｍｇ，３７￣Ｃ培养３０　ｄ后观察结果，当含药培　养基上生长的菌落数大于对照培养基上生长的菌落　数的１％时，则认为该菌株对该抗结核药耐药。培　养基中药物终浓度如下：ＩＮＨ　０．２　ｇ／ｍｌ；ＲＦＰ　４０　ｇ／ｍｌ。　、材料　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—６６６３．２０１５．０５．００ｇ　基金项目：南通市科技局社会发展项目（Ｎｏ　Ｈｓ２Ｏｌ２０６９）　作者单位：２２６０１ｌ江苏南通，南通市第六人民医院检验科　通讯作者：陈俊林，Ｅ・ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｆｅｉ５６６３６９＠１６３．ｃｏｎｒ　２　ＭＯＤＳ方法参照文献　Ｊ，利用细胞培养板，　待检菌株检测时设置含药孔，阴性对照孔，阳性对照　孔。将待检菌株调整浊度至３×１０。ＣＦＵ／ｍｌ，在对照　临床肺科杂志２０１５年５月　第２０卷第５期　８０３　表４两种药敏方法时间比较（ＲＦＰ药敏）　注：ｔ＝９．８７１，ｔ（ｄｆ）０．０１＝２．６０１，ｔ＞ｔ（ｄｆ）Ｏ．Ｏ１、Ｐ＜０．０５　讨　论　迄今为止，对结核病治疗最有效的药物为异烟　肼和利福平，是全效杀菌药物。正因为包含这两种　抗结核药物在内的联合方案，才使全世界结核病得　到有效控制。如果抗结核方案中缺少异烟肼和利福　平，其结果是疗程延长，甚至不能治愈。近年来因为　多种原因，特别是不规范治疗，导致耐异烟肼和利福　平结核菌的大量出现　（对异烟肼和利福平同时耐　药称为耐多药结核病），使结核病控制面临巨大困　难。　快速检测结核菌株对异烟肼和利福平是否耐药　是耐药结核病控制关键，传统的罗氏培养及药敏试　验是“金标准”，但耗时需２～３个月甚至更长时间，　远远不能满足临床需求。快速结培及药敏技术是目　前国内外研究的热点，如依赖昂贵检测仪器的　ＢＡＣＴＥＣ一９６０、ＢａｃＴ　ＡＬＥＲＴ３Ｄ、ＰＣＲ—ＳＳＣＰ、ＰＣＲ一直接　测序法、Ｘｐｅｒｔ　ＭＴＢ／ＲＩＦ等　，虽然上述检测技术　日趋成熟，但快速测定大多需特殊的仪器设备，且技　术要求高、检测费用很大，且基因检测难以普及应　用。如何寻找到细菌学耐药与临床耐药结果一致性　确切、操作简单、检测快速、成本低廉、不需要特殊设　备，检出的敏感性、特异性和常规药物敏感试验高度　一致、重复性好、能一次性检测基本覆盖目前抗结核　一线方案和二线方案药物并适合向基层推广普及应　用的适宜技术，将是广大结核病防治工作者梦寐以　求的事。２０００年，Ｃａｖｉｅｄｅｓ等通过大量实验发现结　核菌在液体培养基中生长会有特征性索状结构的形　成，该结构较容易在显微镜下被观察到，并且结核菌　在液体培养基中生长速度较固体培养基中快，于是　建立了ＭＯＤＳ技术，利用该技术观察索状结构的有　无即可判断待检菌株的耐药性¨　。该技术是通过　研究结核菌生长、活力和代谢特点建立的新的表型　检测方法，目前国内一些医疗机构已在实验室试　用　］。　笔者利用ＭＯＤＳ技术对本院分离的２０１株结核　菌株进行了耐异烟肼和利福平检测，并同罗氏药敏　进行了比较，结果发现两种药敏检测方法符合率高　度一致，异烟肼组符合率达９８．５％，利福平组符合　率达９９．５％。且ＭＯＤＳ技术原理明确，在检出时间　方面较罗氏药敏有明显的优势；而且采用微孔板法　检测，操作简单，无需特殊仪器，可以同时检测大量　样本，成本较低，大大减少了工作人员的工作量；能　通过系列梯度倍比稀释观察到结核菌株在两种药物　不同药物浓度下的ＭＩＣ分布情况，区别低耐药和高　耐药；还通过两种方法检测对比观察到少部分异质　性耐药结核菌　。正是利用该技术，在临床工作中　快速发现了耐异烟肼和耐利福平菌株，及时调整了　治疗方案，避免了无效用药。笔者认为该技术能推　广应用到耐药结核病的快速诊断，为耐药结核病的　控制增添重要的砝码。　目前实验室应用ＭＯＤＳ技术，待检标本多为结　核分枝杆菌临床分离株，方便将待检菌株调整至理　想浊度进行实验并判读结果。如何利用ＭＯＤＳ技　术直接检测涂阳痰标本耐药情况以进一步缩短实验　时间，以及痰标本含菌量多少、药物后效应对检测的　影响尚有待进一步观察。相信随着该技术推广应　用，目前一些问题会得到圆满解决。　参考文献　［１］　全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国第五　次结核病流行病学抽样调查办公室．２０１０年全国第五次结核　病流行病学抽样调查报［Ｊ］．中国防痨杂志，２０１２，３４（８）：４８５　—５０８．　［２］钟球　现代结核病控制面临的三大挑战［Ｊ］．广东医学，２０１２，　３ｌ（１５）：１９０５—１９０７．　［３］　Ｓｈｉｆｅｒａｗ　Ｇ，Ｗｏｌｄｅａｍａｎｕｅｌ　Ｙ，Ｇｅｂｅｙｅｈｕ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉ—　ｅＦｏ。ｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｆｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏ．　ｂｉｏｌ，２００７，４５（４）：１０９３－－１０９７．　［４］　中国防痨协会基础专业委员会主编．结核病诊断实验室检验　规程［Ｍ］．北京：中国教育文化出版社，２００６，４６—４９．　［５］顾德林，陈俊林，黄飞．ＭＯＤＳ技术快速检测莫西沙星对结核菌　药物敏感性研究［Ｊ］．中外医学研究，２０１３，１１（３０）：１３９—１４０．　［６］金文围，郑瑞娟，王洁，等．显微镜观察药物敏感性试验检测结　临床肺科杂志２０１５年５月　第２０卷第５期　核杆菌的耐药性［Ｊ］．中华预防医学杂志，２００９，４３（１）：２４—　２７．　ｃｒｅ—ｓｃｏｐｉｃ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ—ｅｒｓｉｓｔｎｔａ　Ｍｙｃｏｂ￣ｔｅｉｆｕｍ　ｔｕｂｅｃｒｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏ—　ｂｉｏｌ，２００７，４５（４）：１０９３—１ｏ９７．　［７］　阴灵芳，孙惠平，周永，等．耐利福平作为筛选耐多药结核病指　标的评估［Ｊ］．临床肺科杂志，２０１３，１８（９）：１６５６—１６５８．　［１３］陆俊梅，王洁，黄晓辰，等．显微镜观察药物敏感性检测技术在　痰标本直接药敏试验中的应用［Ｊ］．中华预防医学杂志，２０１１，　４５（１）：２１—２５．　［８］尹青琴，申阿东．ｘｐｅｆｔ　ＭＴＢ／ＲＩＦ试验在结核病诊断中的研究　现状［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２０１２，３５（５）：３６３—３６５．　［９］　Ｃｈａｋｒａｖｏｒｔｙ　Ｓ，Ｋｏｔｈａｒｉ　Ｈ，Ａｌａｄｅｇｂａｍｉ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｒａｐｉｄ　ｈｉｇｈ　ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｉｆａｍｐｉｎ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ａｎｄ　ｈｅｔｅｒｏｒｅ．ｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｔｅｒｉｕｒｎ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｂｙ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｓｌｏｐｐｙ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｅａｃｏｎ　ｍｅｈｉｎｇ　ｔｅｒｎ－　［１４］付佑辉，郑瑞娟，王洁，等．显微镜观察药物敏感度检测技术在　二线抗结核药耐药性检测中应用［Ｊ］．中华检验医学杂志，　２０１０，３３（１）：２５—２９．　ｐｅｒａｔｕｒｅ　ｃｏｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃ　ｒｏｂｉｏｌ，２０１２，５０（７）：２１９４—２２０２．　［１５］陈俊林，顾德林，施军卫，等．基因检测及ＭＯＤＳ技术快速诊断　结核分枝杆菌对左氧氟沙星的敏感性研究［Ｊ］．国际检验医学　杂志，２０１２，３３（１３）：１５５４—１５５８．　［１６］柳清云，孙刚，高谦．结核分枝杆菌（ＭＴＢ）异质性耐药研究进　展［Ｊ］．复旦学报（医学版），２０１３，４０（１）：１—４．　［１０］牛建军，张轶，温慧欣，等．应用探针熔解曲线分析法检测结核　分枝杆菌ｒｐｏＢ基因突变［Ｊ］．中华预防医学杂志，２０１１，４５　（３）：２２５—２２９．　［１１］马艳艳，李辉，赵东阳，等．荧光ＰＣＲ探针熔解曲线法检测结核　分枝杆菌耐利福平突变研究［Ｊ］．中国国境卫生检疫杂志，　２０１１，３４（６）：４５１—４５６．　［收稿日期：２０１４—０９—２６］　［１２］Ｓｈｉｆｅｒａｗ　Ｇ，Ｗｏｌｄｅａｍａｎｕｅｌ　Ｙ，Ｇｅｂｅｙｅｈｕ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉ—　（上接第８００页）　［９］Ｋａｍａｔｂ　ＡＴ，Ｆｅｎｇ　ＣＧ，Ｍａｃｄｏｎａｌｄ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉｆｅｅｒｎｔｉａｌ　ｐｒｏｔｅｃ—　ｔｉｖｅ　ｅｆｉｃａｃｙ　ｏｆ　ｆＤＮＡ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｍｙｃｏ—　间１５ｍｉｎ内获得可靠结果，将在临床ＴＢ实验室得　到广泛应用。　参考文献　［１］　中华医学会结核病学分会《中华结核和呼吸杂志》编辑委员　会．非结核分枝杆菌病诊断与治疗专家共识［Ｊ］．中华结核和　呼吸杂志，２０１２，３５（８）：５７２—５８０．　［２］　Ｇｒｉｆｉｔｈ　ＤＥ，Ａｋｓａｍｉｔ　Ｔ。Ｂｒｏｗｎ—Ｅｌｌｉｏｔｔ　ＢＡ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　０ｍｃｉｌａ　ＡＴＳ／ＩＤＳＡ　ｓｔａｔｅｍｅｎｔ：ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｉｒｕｍ　ｔｕｂｅｃｒｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，１９９９，６７（４）：１７０２—　１７０７．　［１０］Ｐａｌｅｎｄｉｒａ　Ｕ，Ｋａｍａｔｈ　ＡＴ，Ｆｅｎｇ　ＣＧ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒ－　ｌｅｕｋｉｎ一１２　ｃｈａｉｎｓ　ｂｙ　ａ　ｓｅｌｆ－ｓｐｌｉｃｉｎｇ　ｖｅｃｔｏｒ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆ　ＤＮＡ　ａｎｄ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｓ　ＢＣＧ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，　２００２。７０（４）：１９４９—１９５６．　［１１］Ｐａｒｋ　ＭＹ，Ｋｉｍ　ＹＪ，Ｈｗａｎｇ　ＳＨ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ｉｍｍｕｎｏ—　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ａｓｓａｙ　ｋｉｔ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ　ｍｙｅｏｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｃｒｉｔ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ，２００７，１７５（４）：３６７—４１６．　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，　２００９，４７（２）：４８１—４８４．　［３］ＯＧｒａｄｙ　Ｊ，Ｍａｅｕｒｅｒ　Ｍ，Ｍｗａｂａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｗ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｄｉａｇ・　［１２］Ａｎｇ　ＣＦ，Ｃａｊｕｃｏｍ　ＭＡ，Ｋｉｍ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｒａｐｉｄ　ａｓｓａｙ　ｏｒ　ｆｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｇｒｏｗｎ　ｉｎ　ｓｏｌｉｄ　ａｎｄ　ｎｏｓｔｉｅｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｒｕｇ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ［Ｊ］．　Ｃｕｒｔ　Ｏｐｉｎ　Ｐｕｌｍ　Ｍｅｄ，２０１１，１７（３）：１３４—１４１．　ｌｉｑｕｉｄ　ｍｅｄｉａ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｔｕｂｅｒｃ　Ｌｕｎｇ　Ｄｉｓ，２０１１，１５（１１）：１４７５—　１４７７．　［４］　张涛，吕纯芳，卢留珠．ＢＡＣＴＥＣ　ＭＧＩＴ９６０系统快速培养分枝　杆菌的效果评价［Ｊ］．临床肺科杂志，２０１１，１６（５）：７１７—７１８．　［５］ＫｏｈＷＪ，ＫｏＹ，Ｋｉｍ　ＣＫ，Ｐａｒｋ　ＫＳ，Ｌｅｅ　ＮＹ．Ｒａｐｉｄ　ｄｉａｇｎｏ—　ｓｉｓ　ｏｆ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｕｈｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔｎｃｅ　ｕｓａｉｎｇ　ａ　ＭＧＩＴ　９６０　ｓｙｓ・　［１３］Ｌｉ　Ｈ，Ｕｌｓｔｒｕｐ　ＪＣ，ＪｏｎａｓｓｅｎＴＯ，ｅｔａ１．Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒ　ａｂｓｅｎｃｅ　ｏｆｔｈｅ　ＭＰＢ６４　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｓｏｍｅ　ｓｕｂｓｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ｍｙｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｓ　ＢＣＧ［Ｊ］．　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ，１９９３，６１（５）：１７３０—１７３４．　ｔｅｍ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，２０１２，３２（４）：２６４—２６９．　［１４］Ｈｉｌｌｅｍａｎｎ　Ｄ，Ｒｕｓｃｈ—Ｇｅｒｄｅｓ　Ｓ，Ｒｉｃｈｔｅｒ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃａｐｉｌｉａ　ＴＢ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ／ｕｍ　ｔａ—　［６］王宁．全国第五次结核病流行病学抽样调查资料汇编［Ｍ］．　北京：军事医学科学出版社，２０１１：１５—１８．　ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｉｓｏｌａｔｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｆ　Ｊ　Ｔｕｂｅｒｃ　Ｌｕｎｇ　Ｄｉｓ，２００５，９　（１２）：１４０９一ｉ１．　［７］Ｃｏｌｅ　ＳＴ，Ｂｒｏｓｃｈ　Ｒ，Ｐａｒｋｈｉｌｌ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｃｉｐｈｅｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　［１５］何霞，谭守勇，罗春明．应用ＭｐｒｌＹ３４为靶标快速检测结核分　枝杆菌生长的研究［Ｊ］．广东医学，２０１０，３１（２）：２２２—２２４．　［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９８，３９３（６６８５）：５３７—５４４．　［８］Ｈａｒｂｏｅ　Ｍ，Ｎａｇａｉ　Ｓ，Ｐａｔａｒｅｒｙｏ　ＭＥ，ｅｔ　１ａ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ＭＰＢ６４，ＭＰＢ７０，ａｎｄ　ＭＰＢ８０　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｒｉｓ　ＢＣＧ［Ｊ］．　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｉｍｍｕｎ．１９８６，５２（１）：２９３—３０２．　［收稿日期：２０１４—０７—０９］