２０２０年１２月 第２４期
沙门氏菌检测中应用ＰＣＲ法与传统细菌培养法检测的分析
刘莉莉
江苏省泰州市姜堰区疾病预防控制中心，江苏 泰州 225500
【摘要】目的：本文主要分析沙门氏菌检测过程中使用PCR方法和传统细菌培养方法的价值。方法：从2016年8月至2019年9月公共场所从业人员健康体检人员中选择116例，收集参与本次实验人员的肛拭子，根据最终的检测方法将其分为两个不同的组别，PCR组与传统细菌培养组各58例。对进行传统细菌培养之后的样本分别使用PCR方法以及传统细菌培养方法检测沙门氏菌，最终对比两种方法的阳性检出率、检测时间、成本以及人力。结果：本次实验研究结果显示，使用PCR方法检测的时间要显著短于传统的细菌培养，且节省较多的人力，但PCR检测方法消耗的成本要比传统的细菌培养高一些。并且，PCR检测方法的阳性检出率要比传统细菌培养法的阳性检出率高(P<0.05)。结论：虽然沙门氏菌检测中使用PCR的方法需要消耗高一些的成本，但使用此种方法可以节省检测的人力，并缩短人员的监测时间，可以根据PCR检测的特点将其使用于公共场所从业人员的沙门氏菌快速筛选工作中，从而帮助更多的人及时检测致病菌，最终展开针对性的疾病治疗。【关键词】沙门氏菌检测；PCR法；传统细菌培养法检测[中图分类号]R446.5 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2020)24-0174-02
随着我国人们群众的生活水准不断升高，人们的生活节奏也在逐渐变快，越来越多的人群选择使用方便食物，不仅可以显著素缩短等待食物的时间，还能实现饱腹的效果，其深受广大人们群众的喜爱。但是，这些冷冻食物中存在部分食源性致病菌，尤其是沙门氏菌，其对人体造成的伤害十分严重，极易对人体的安全产生部分隐患。我国对于食品以及公共场所的从业人员制定了相关的规定，要求这些工作人员每年必须要进行伤寒、副伤寒等沙门菌的检测。这是由于沙门菌是一种对人体肠道产生损伤最大的致病菌，且该病菌的感染率较高，甚至可以导致人体发生死亡[2]。并且，沙门杆菌常存在于人体或者动物的肠道内，可以通过动物的粪便污染食品、水源或者通过接触发生传播[3]。而我国食品以及公共场所从业人员由于其具有的职业特殊性，一旦其中存在感染或者携带沙门氏菌的人，极易发生严重的公共健康事件
[4]
[1]
1.3统计和分析 本次临床实验结果数据使用统计学软件SPSS23.0对其进行相关的统计以及分析，阳性检出率使用计算型指标以例(例,%)表示，并进行χ2检验。若P<0.05，则代表本次实验的两组具有显著性差异。
2 结果
2.1阳性检出率 本次实验研究的检测结果显示，PCR检测方法的阳性检出率要比传统细菌培养法的阳性检出率高，详见表1。
表1 阳性检出率(例,%)
组别
PCR组传统组2
χ值P值
例数5858
检出数量
5750
无效数量
18
总有效率97.2886.215.9024<0.05
。基于此，本文将主要研究PCR检测和传统细菌培养检测
[5]
2.2检测成本、时间、人力 通过统计本次实验研究结果发现，使用PCR检测和传统细菌培养检测沙门氏菌的方法具有较大的不同：PCR检测方法可以同时对样本展开实验检测工作，显著缩短了人员领取健康证的时间，并且，使用PCR检测沙门氏菌在整个检测过程只需1人进行操作，要比传统的细菌培养方法节省2～3人的人力成本，从而降低工作人员的时间以及精力投入。但是，使用PCR检测沙门氏菌的成本为11元，而使用传统细菌培养的成本则为7月。然而，传统的细菌培养方法需要检测人员具有较强的主观判断性，部分人员由于自身能力的不足极易发生漏检或者误判，最终影响检测结果，而PCR检测是机器进行操作可以迅速检测标本并获得精准的检测结果。详见表2。
表2 PCR检测和传统细菌培养检测对比
项目PCR检测传统细菌培养消耗成本每人检测成本约为11元每人检测成本约为7元人力1人操作即可3～4人操作健康证发放时间3d左右5d左右
对沙门氏菌的效果，现报告如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 从2016年8月至2019年9月公共场所从业人员健康体检人员中选择116例，收集参与本次实验人员的肛拭子，根据最终的检测方法将其分为两个不同的组别，PCR组与传统细菌培养组各58例。使用生科源技术公司生产的一次性多功能采样器、PCR试剂盒、沙门氏菌显色培养基、XLD培养基、API20E生化鉴定卡以及TSI琼脂。并且，还需配备PCR检测仪器、生物安全柜、恒温培养箱、离心机以及不同规格的加样枪。
1.2方法 首先，使用一次性多功能采样器采取出本次实验的肛拭子标本，采样的时候需要注意将采样器轻柔的插进人员肛门中3cm的部分，并轻轻旋转3周之后将其取出，最终保证每个采样头都可以顺利采集到的粪便的标本。采集之后需要掰断采样器头部，并将其放置在37℃的恒温培养箱中6h。
传统的细菌培养法：严格按照《食品安全国家标准 食品微生物学检测 沙门氏菌检测》的内容流程以及标准进行培育工作。
PCR检测：将样本进行混匀，每组10个标本对其进行离心机分离、沉淀等环节后制成标本模板，并对标本模板中取出部分样本加入到装好反应体系的反应管中进行扩增，最后根据结果进行分离培养以及检测。
3 讨论
沙门氏菌属于一种寄生在人体和动物肠道内的常见病原微生物，人类由于食用可以污染的食品之后，会由于进食这些被污染的水或食物而发生疾病，且感染沙门氏菌的人体症状也存在部分的差异，感染沙门氏菌程度比较轻的患者会出现短期自限性胃肠炎疾病，而感染程度比较重的人则会发生危及人体生命的疾病，像副伤寒、败血症等疾病[6]。现阶段，在国内外的相关新闻报道中，由于沙门氏菌而引起的食物中
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毒疾病位居首位或第二位。由于沙门氏菌对人体产生的健康的危害性比较大，当前的临床医学新闻报道中，对水源以及事物进行检测工作十分重要。因此，这对于沙门氏菌的快速检测工作，则提出出更高的检测要求以及检测标准。但是，由于沙门氏菌检测的实际操作比较复杂、操作周期比较长，其需要使用的试剂比较多，且检测的实际结果也会受到多种因素的共同影响。随着；临床分子生物技术的迅速发展，PCR技术在沙门氏菌的实际检测过程中，也扮演者十分重要的角色。PCR技术通过对细菌内的遗传物质进行检测之后，显著弥补了传统检测方法中存在不足之处，其被国外的学者应用于临床追踪以及检测细菌性腹泻等方面。传统细菌培育的检测方法对检测沙门氏菌的时间较长、操作比较复杂、检测人员的工作量较大，常需要5d才能获得最终的检测结果。并且，由于传统细菌培育的结果常是人体肉眼决定，所以常会发生漏检以及误判的情况，对检测人员的要求比较高。但是，PCR检测方法不仅具有检测时间较短、操作简便，常是机器自动检测，且检测的准确度也显著高于传统的细菌培养方法，将其使用与个公共卫生场所从业人员的快速筛选中，具有较高的意义。沙门氏菌检测人员使用PCR技术检测的过程中，通过从患者的粪便之中提取出DNA组织结果，并使用PCR检测技术对沙门氏菌进行检测，可以提高临床检测的阳性率，并为医生提供部分临床诊断依据，帮助医生制定合理的临床治疗方案，显著提升患者的临床疾病诊断几率，有助于选择合理、有效的抗生素对患者展开疾病的治疗，从而减少耐药菌的出现。
与此同时，随着分子生物技术的不断发展，PCR检测技术也在沙门氏菌的检测中承担着重要的角色，而将PCR技术应用于沙门氏菌的检测中，不仅可以有效弥补传统检测方法中存在的不同，其还具有操作比较简便的方法，并被诸多的临床学者应用于沙门氏菌的专门检测中。并且，由于沙门氏菌对人体产生的危害性比较大，这就要求临床检测需要更加快速、简便，从而缩短检测时间，提升患者的疾病就诊时间，促使患者可以及早接受疾病治疗，并顺利恢复身体健康。检测人员通过直接从检测粪便样本中提取DNA，并使用PCR技术对其展开检测，其具有十分显著的检测特异性以及较高的灵敏度，十分适合应用于沙门氏菌患者的早期感染诊断中，显著降低患者存在耐药菌株，大幅度提升患者的疾病治疗有效性，便于医生对患者进行合理的抗生素治疗，提升患者的疾病治疗满意度。
（上接第125页）
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[7]
调查研究
通过本次实验研究结果发现，使用PCR检测和传统细菌培养检测沙门氏菌的方法具有较大的不同：PCR检测方法可以同时对样本展开实验检测工作，显著缩短了人员领取健康证的时间，从以往的5d内缩短为3d左右。并且，使用PCR检测沙门氏菌在整个检测过程只需要1人进行独立操作就行，要比传统的细菌培养方法节省2～3人的人力成本，从而降低工作人员的时间以及精力投入。但是，使用PCR检测沙门氏菌的成本为11元，而使用传统细菌培养的成本则为7月。然而，传统的细菌培养方法需要检测人员具有较强的主观判断性，部分人员由于自身能力的不足极易发生漏检或者误判，最终影响检测结果，而PCR检测是机器进行操作可以迅速检测标本并获得精准的检测结果。由此可见，虽然PCR的成本稍高但其各方年都显著优于传统的方法，其可以应用于快速筛选工作中。并且，PCR检测方法的阳性检出率要比LAMP的阳性检出率高(P<0.05)。
综上所述，虽然沙门氏菌检测中使用PCR的方法需要消耗高一些的成本，但使用此种方法可以节省检测的人力，并缩短人员的监测时间，可以根据PCR检测的特点将其使用于公共场所从业人员的沙门氏菌快速筛选工作中，从而帮助更多的人及时检测致病菌，最终展开针对性的疾病治疗。参考文献
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作者简介：刘莉莉(1979-)，女，汉族，江苏泰州人，大学本科，副主任技师，主要从事微生物检验科相关工作。
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