复合核苷肽溶液促进肉鸡红细胞免疫应答的研究

山东农业科学２０１１，１２：８８—９０　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　复合核苷肽溶液促进肉鸡红细胞免疫应答的研究　林淑玲　，李瑞芹　，邵文晶　，骆延波　（１．栖霞市畜牧兽医工作站，山东栖霞２６５３００；２．昌乐县畜牧兽医局，山东昌乐２６２４００；　３．乳山市城北兽医站，山东乳山２６４５００；　４．山东省动物疫病防治与繁育重点实验室／山东省健牧生物药业有限公司，山东济南２５０１００）　摘要：将１８０只健康肉雏鸡随机分成３组，每组６０只。７日龄将Ａ、Ｂ组分别口服复合核苷肽溶液　（０．０５　ｍｌ／只）和盐酸左旋咪唑（１５　ｍｇ／只），ｃ组为空白对照。于试验后７、１４天分别测定各组鸡的红细胞一　Ｃ３ｂ受体花环率和红细胞一Ｉｃ受体花环率。结果表明，１４、２１日龄时Ａ组红细胞一Ｃ３ｂ受体花环率显著高于　Ｂ组和对照组（Ｐ＜０．０５），１４日龄时Ｂ组红细胞一Ｃ３ｂ受体花环率也显著高于对照组，２１日龄时二者差异不　显著（Ｐ＞０．０５）。而１４日龄时Ａ、Ｂ组红细胞一Ｉｃ受体花环率与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５），到２１日龄时　Ａ、Ｂ组红细胞一Ｉｃ受体花环率与对照组差异显著（Ｐ＜０．０５），表明复合核苷肽能够显著提高红细胞免疫功　能。　关键词：复合核苷肽溶液；红细胞一Ｃ３ｂ受体花环率；红细胞一Ｉｃ受体花环率　中图分类号：￥８３１．１　文献标识号：Ａ　文章编号：１００１—４９４２（２０１１）１２—００８８—０３　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ　Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆ　Ｂｒｏｉｌｅｒ　Ｒｅｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅｌｌ　ＬＩＮ　Ｓｈｕ—ｌｉｎｇ　，ＬＩ　Ｒｕｉ—ｑｉｎ　，ＳＨＡＯ　Ｗｅｎ—ｊｉｎｇ　，ＬＵ０　Ｙａｎ—ｂｏ　（１．Ｑｉｘｉａ　Ａｎｉｍａｌ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｑｉｘｉａ　２６５３００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｈａｎｇｌｅ　Ｂｕｒｅａｕ　ｏｆＡｎｉａｌｍ　Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉａｒｎｙ，Ｃｈａｎｇｌｅ　２６２４００，Ｃｈｉａ；３．Ｃｈｅｎｇｂｎｅｉ　Ｖｅｔｅｒｉａｒｎｙ　Ｓｔａｔｏｉｎ　ｏｆＲｕｓｈａｎ　Ｃｉｔｙ，Ｒｕｓｈａｎ　２６４５００，Ｃｈｉａ；４．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　ｎＫｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＡｎｉｍａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ／Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｊｉａｎｍｕ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊ／ａｎ　ｎ２５０１００，Ｃｈｉａ）ｎ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｎｅ　ｈｕｎｄｒｅｄ　ａｎｄ　ｅｉｇｈｔｙ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ，６０　ｐｅｒ　ｇｒｏｕｐ．Ａｔ　７一ｄａｙ　ｏｌｄ．ｔｈｅ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｉｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ　ｔｏｏｋ　ｏｒａｌｌｙ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ　ｗａｓ　ａｓ　ｃｈｅｃｋ．Ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｆｏｒ　７　ａｎｄ　１４　ｄａｙｓ，ｔｈｅ　ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲ　ｒｏｓｓｅｔｅ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ＲＢＣ—ＩＣＲ　ｒｏｓｓｅｔｅ　ｒａｔｅ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲ　ｒｏｓｓｅｔｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｕｐ　Ａ　ｗｅｒｇｅ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）ａｔ　１４一　ａｎｄ　２１一ｄａｙ　ｏｌｄ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｇｒｏｕｐ　Ｂ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｎｌｙ　ａｔ　１４一ｄａｙ　ｏｌｄ．　Ｔｈｅ　ＲＢＣ——ＩＣＲ　ｒｏｓｓｅｔｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｏｕｐ　Ａ　ａｎｄ　Ｂ　ｈａｄ　ｎｏ　ｓｇｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｔ　１４－－ｄａｙ　ｏｌｄ，ｂｕｔ　ｈａｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ａｔ　２１一ｄａｙ　ｏｌｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｉｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌ１．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＲＢＣ—Ｃ３ｂＲ　ｒｏｓｅｔｔｅ　ｒａｔｅ；ＲＢＣ—ＩＣＲ　ｒｏｓｅｔｔｅ　ｒａｔｅ　细胞免疫系统在动物机体的免疫功能中发挥　着重要的作用，其中红细胞免疫系统也是重要的　部分　。因此，红细胞免疫研究已成为考察　一机体免疫状态的重要指标之一，其中红细胞一　Ｃ３ｂ受体花环率及红细胞一Ｉｃ受体花环率是反　映红细胞免疫状态的重要指标。目前以生物活性　收稿日期：２０１１—０９—０８　作者简介：林淑玲（１９７０一），女，畜牧师，现从事畜牧兽医技术推广工作。　通讯作者：骆延波（１９７３一），男，预防兽医学硕士，副研究员，现从事新兽药研制及兽医免疫学研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｕｏｙａｎｂｏｓａａｓ＠　１６３．ｃｏｎｌ　第１２期　林淑玲等：复合核苷肽溶液促进肉鸡红细胞免疫应答的研究　８９　因子类免疫增强剂增强机体红细胞免疫功能的研　究逐渐增多，但复合生化活性因子类免疫增强剂　较少。复合核苷肽溶液作为复合生化类免疫增强　剂，具有生物活性高，能有效增强免疫力、提高疫　苗免疫效果、缓解疾病临床症状的作用。左旋咪　唑为咪唑衍生物，是兽医临床广泛应用的抗蠕虫　药物，也具有较强的机体免疫调节作用　Ｊ。本研　究将复合核苷肽溶液与盐酸左旋咪唑对雏鸡红细　胞免疫应答作用影响效果做了对比试验，现报告　如下。　１材料与方法　１．１供试材料　１．１．１试验动物　１日龄健康雏鸡２００只。饲　养３天后，挑选出健康雏鸡１８０只供试验用。　１．１．２　试验药品　复合核苷肽溶液，批号　２００９０８０１，规格为１０　ｍｌ／瓶。本研究室自制。盐　酸左旋咪唑，购于兽药批发市场。　１．１．３饲料　雏鸡全价配合饲料，购于兽药批　发市场。　１．１．４化学试剂０．５％肝素钠抗凝剂（山东生　化试剂中心分装）；补体致敏酵母多糖冻干试剂　（上海长海医院免疫室生产）；酵母多糖冻干试剂　（上海长海医院免疫室生产）；０．２５％戊二醛液　（固定液）：在０．１　ｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ　７．４磷酸盐缓冲液９　ｍｌ中加入２５％戊二醛液０．１　ｍｌ，混合，置４￣Ｃ冰　箱中保存备用。　１．２试验方法　１．２．１试验分组选试验用鸡１８０只，随机分成　Ａ、Ｂ、ｃ三组，Ａ组每只鸡口服０．０５　ｍｌ复合核苷　肽溶液，Ｂ组每只鸡口服盐酸左旋咪唑１５　ｍｇ／只，　Ｃ组为空白对照。　１．２．２试验方法Ａ、Ｂ、Ｃ三组７日龄按照分组　分别口服使用复合核苷肽溶液、左旋咪唑和生理　盐水，于试验后７天、１４天参照细胞免疫检测方　法　Ｉ５　分别测定各组鸡的红细胞一Ｃ３ｂ受体花环　率和红细胞一ＩＣ受体花环率，统计结果，并求其　平均值。　２结果与分析　试验结果（表１）表明，１４、２１日龄时Ａ组红　细胞一Ｃ３ｂ受体花环率显著高于Ｂ组和对照组　（Ｐ＜０．０５），１４日龄时Ｂ组的红细胞一Ｃ３ｂ受体　花环率也显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），２１日龄时　二者差异不显著（Ｐ＞０．０５）。１４日龄时Ａ、Ｂ两　组红细胞一Ｉｃ受体花环率与对照组差异不显著，　而２１日龄时Ａ、Ｂ两组红细胞一Ｉｃ受体花环率均　显著低于对照组（Ｐ＜０．０５），表明复合核苷肽溶　液能够有效提高鸡的红细胞免疫功能。　表ｌ　复合核苷肽溶液和左旋咪唑对肉鸡　红细胞免疫的影响　（又±ｓｏ）　日龄（天）组别红细胞一Ｃ３ｂ受体花环率（％）　红细胞一ＩＣ受体花环率（％）　注：同列数字后标注不同大小写字母分别表示０．Ｏ１和０．０５　水平差异显著。　３讨论与结论　３．１　红细胞一Ｃ３ｂ：受体花环率与红细胞膜上的　Ｃ３ｂ受体数量、活性有关，复合核苷肽溶液能增强　红细胞膜上Ｃ３ｂ受体活性　Ｊ。复合核苷肽溶液　既可刺激机体产生淋巴因子，间接激活红细胞膜　Ｃ３ｂ受体活性，也可　直接激活红细胞膜表面受体　的活性。研究证明，红细胞具有免疫粘附功能而　清除机体的免疫复合物、促进白细胞吞噬作用及　免疫调控作用，是宿主防御机制的一部分。而红　细胞的免疫粘附作用是通过Ｃ３ｂ受体实现的，而　且血液中Ｃ３ｂ受体总数的９５％都在红细胞　上　Ｉ６．７＿。在体外培养，抗Ｃ３ｂ受体抗体可刺激Ｂ　细胞产生免疫球蛋白。本试验结果显示，两个试　验组与对照组红细胞一Ｃ３ｂ受体花环率、　红细胞一Ｉｃ受体花环率差异显著，而且红细胞免　疫与Ｔ细胞功能存在显著的协同作用，说明红细　胞膜Ｃ３ｂ受体的数量及活性的大小明显地影响　着机体的免疫功能的高低。另外，因为红细胞一　Ｉｃ受体花环率与血清中ＣＩＣ含量有关，花环率的　降低标志着血清中ＣＩＣ含量的降低，表明机体的　免疫功能增强，从而证明复合核苷肽溶液与盐酸　左旋咪唑对雏鸡具有明显的红细胞免疫增强作　用。试验结果表明，复合核苷肽溶液组与盐酸左　旋咪唑组差异显著，提示两者对于雏鸡红细胞免　疫应答作用影响程度存在差异。　３．２复合核苷肽溶液具有较高生物活性，其作用　机理与化学类免疫增强剂盐酸左旋咪唑等存在较　山东农业科学２０１１，１２：９０～９２　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　微膜过滤等度离子色谱法测定　生鲜乳中硫氰酸根残留量　郭栋梁　，阮彦东　，毛江胜　（１．山东省农业科学院中心实验室／山东省食品质量与安全检测技术重点实验室，山东济南２．滨州经济开发区里则办事处，山东滨州２５６６５６）　２５０１００；　摘要：建立了离子色谱电导法测定生鲜牛奶中硫氰酸根的方法。样品经乙酸、氢氧化钾溶液沉淀蛋白，　滤膜过滤，无需梯度洗脱。方法检出限为０．０５　ｍｇ／Ｌ，线性关系Ｙ＝０．０４８８Ｘ一０．００７５，相关系数Ｒ＝０．９９８５。　通过该方法对市场上的生鲜奶进行测定，平均含量在０．２～１３．５　ｍｇ／Ｌ。　关键词：离子色谱法；生鲜奶；硫氰酸根　中图分类号：Ｑ５ｏ３　文献标识号：Ａ　文章编号：１００１—４９４２（２０１１）１２—００９０—０３　硫氰酸钠主要用作丙烯腈纤维抽丝溶剂、化　肿和呼吸衰竭。由于我国还没有规定其限量标　准，许多不法奶户违法添加硫氰酸钠，因此研究生　鲜奶中硫氰酸根的测量具有重要意义。　牛奶中硫氰酸钠的检验方法较多，比如分光　学分析试剂、彩色电影胶片冲洗剂、某些植物脱叶　剂，还用于制药、印染、橡胶处理、黑色镀镍及制造　人造芥子油等。原料乳或奶粉中掺入硫氰酸钠后　可有效地抑菌，因此乳制品中添加硫氰酸钠可用　光度法、色谱法、电分析法、荧光动力学法和离子　交换色谱法等。本试验研究了生鲜奶中硫氰酸根　的离子色谱检测方法。　于保鲜，可延长牛奶保质期。　２００８年１２月１２日卫生部发布的第一批“违　禁及滥用食品添加剂品种名单”中明确规定乳及　乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。硫氰酸钠　在人体内释放的氰根离子能很快与细胞色素氧化　ｌ　实验部分　１．１仪器和试剂　酶中的三价铁离子结合，抑制该酶活性，使组织不　能利用氧，可引起重度中毒，出现意识丧失、抽搐　直至角弓反张、血压下降、尿便失禁，常伴发脑水　收稿日期：２０１１—０６—２１　仪器：离子色谱仪（美国戴安ＩＣＳ一９０），配电　导检测器；高速冷冻离心机（德国Ｓｉｇｍａ）。　试剂：纯净水、浓硫酸（优级纯）、氢氧化钾　基金项目：山东省自然科学基金项目（ＺＲ２０１０ＣＱ００７）资助。　作者简介：郭栋梁（１９７８一），男，助理研究员，主要从事食品检测、质量管理工作。　通讯作者：毛江胜（１９７７一），男，助理研究员，主要从事复杂基质下的微量有机化合物的分析研究。　：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：　大差异＿８　ｊ。动物细胞因子为动物机体内正常存　在的物质，正常状态下其浓度很低，当浓度提高　后，其生物活性表现相当显著，能够在较短时间内　与兽医，１９９１，４：１８３—１８４．　崔治中．兽医免疫学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００４．　乔彦良，杨汉春，郭玉璞，等．左旋咪唑对鸡细胞免疫和　体液免疫功能的作用［Ｊ］．畜牧与兽医，２０００，２：２２—２６．　提高机体免疫应答反应的强度及速度，而化学类　免疫增强剂发挥作用时需要较长时间及较大剂　量，因此细胞因子类免疫增强剂优于化学类免疫　增强剂，是很有发展前途的生物免疫增强剂。　参考文献：　张绍蕊，曾玉明．红细胞免疫粘附功能的测定及其临床意　义［Ｊ］．中华医学检验杂志，１９９２，１５（４）：２３７—２３８．　崔治中．兽医免疫学实验指导［Ｍ］．北京：中国农业出版　社，２００６．　刘景田，张洁．红细胞免疫学［Ｍ］．西安：陕西科学技术　出版社，１９９５，１２—５２．　骆延波，张祥礼，张再辉，等．免疫活性肽促进雏鸡红细胞免　『１］　刘瑞田．动物的红细胞免疫功能及其影响因素［Ｊ］．畜牧　疫应答的研究［Ｊ］．山东农业科学，２００７，３：９４—９５．