氮原⼦在侧链上，碱性较⼀般⽣物碱强，易与酸成盐。托烷类（硫酸阿托品和氢溴酸⼭莨菪碱）
阿托品和⼭莨菪碱是由托烷衍⽣的醇（莨菪醇）和莨菪酸缩合⽽成，具有酯结构。分⼦结构中，氮原⼦位于五元酯环上，故碱性也较强，易与酸成盐。喹啉类（硫酸奎宁和硫酸奎尼丁）
奎宁和奎尼丁为喹啉衍⽣物，其结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分，各含⼀个氮原⼦，喹啉环含芳⾹族氮，碱性较弱；喹啉碱微脂环氮，碱性强。
异喹啉类（盐酸吗啡和磷酸可待因）
吗啡分⼦中含有酚羟基和叔胺基团，故属两性化合物，但碱性略强；可待因分⼦中⽆酚羟基，仅存在叔胺基团，碱性较吗啡强。
吲哚类（硝酸⼠的宁和利⾎平）
⼠的宁和利⾎平分⼦中含有两个碱性强弱不同的氮原⼦，N1处于脂肪族碳链上，碱性较N2强，故⼠的宁碱基与⼀分⼦硝酸成盐。
黄嘌呤类（咖啡因和茶碱）
咖啡因和茶碱分⼦结构中含有四和氮原⼦，但受邻位羰基吸电⼦的影响，碱性弱，不易与酸结合成盐，其游离碱即供药⽤。鉴别试验：特征鉴别反应。
1.双缩脲反应系芳环侧链具有氨基醇结构的特征反应。
盐酸⿇黄碱和伪⿇黄碱在碱性溶液中与硫酸铜反应，Cu2+与仲胺基形成紫堇⾊配位化合物，加⼊⼄醚后，⽆⽔铜配位化合物及其有2 个结晶⽔的铜配位化合物进⼊醚层，呈紫红⾊，具有4个结晶⽔的铜配位化合物则溶于⽔层呈蓝⾊。2.Vitali反应系托烷⽣物碱的特征反应。
硫酸阿托品和氢溴酸⼭莨菪碱等托烷类药物均显莨菪酸结构反应，与发烟硝酸共热，即得黄⾊的三硝基（或⼆硝基）衍⽣物，冷后，加醇制氢氧化钾少许，即显深紫⾊。
3.绿奎宁反应系含氧喹啉（喹啉环上含氧）衍⽣物的特征反应硫酸奎宁和硫酸奎尼丁都显绿奎宁反应，在药物微酸性⽔溶液中，滴加微过量的溴⽔或氯⽔，再加⼊过量的氨⽔溶液，即显翠绿⾊。4.Marquis反应系吗啡⽣物碱的特征反应。
取得盐酸吗啡，加甲醛试液，即显紫堇⾊。灵敏度为0.05µg. 5.Frohde反应系吗啡⽣物碱的特征反应。
盐酸吗啡加钼硫酸试液0.5ml，即显紫⾊，继变为蓝⾊，最后变为棕绿⾊。灵敏度为0.05µg. 6.官能团反应系吲哚⽣物碱的特征反应。
利⾎平结构中吲哚环上的β位氢原⼦较活泼，能与芳醛缩合显⾊。与⾹草醛反应。利⾎平与⾹草醛试液反应，显玫瑰红⾊。
与对-⼆甲氨基苯甲醛反应。利⾎平加对-⼆氨基苯甲醛，冰醋酸与硫酸，显绿⾊，再加冰醋酸，转变为红⾊。7.紫脲酸反应系黄嘌呤类⽣物碱的特征反应。
咖啡因和茶碱中加盐酸与氯酸钾，在⽔浴上蒸⼲，遇氨⽓即⽣成四甲基紫脲酸铵，显紫⾊，加氢氧化钠试液，紫⾊即消失。8.还原反应系盐酸吗啡与磷酸可待因的区分反应。
吗啡具弱还原性。本品⽔溶液加稀铁氰化钾试液，吗啡被氧化⽣成伪吗啡，⽽铁氰化钾被还原为亚铁氰化钾，再与试液中的三氯化铁反应⽣成普鲁⼠蓝。
可待因⽆还原性，不能还原铁氰化钾，故此反应为吗啡与磷酸可待因的区分反应。
特殊杂质检查：
利⽤药物和杂质在物理性质上的差异。
硫酸奎宁中“氯仿-⼄醇中不溶物”的检查盐酸吗啡中“其它⽣物碱”的检查旋光性的差异：⽤于硫酸阿托品中“莨菪碱”的检查对光选择性吸收的差异：利⾎平⽣产或储存过程中，光照和有氧存在下均易氧化变质，氧化产物发出荧光。因此规定：供试品置紫外光灯（365nm）下检视，不得显明显荧光。
吸附性质的差异：硫酸奎宁制备过程中可能存在“其它⾦鸡纳碱”。利⽤吸附性质的差异，采⽤硅胶G薄层进⾏检查。规定限度为0.5%.利⽤药物和杂质和化学性质上的差异。
与⼀定试剂反应产⽣沉淀硫酸阿托品制备过程中可能带⼊（如莨菪碱、颠茄碱）杂质，因此需要检查“其它⽣物碱”。利⽤其它⽣物碱碱性弱于阿托品的性质，取供试品的盐酸⽔溶液，加⼊氨试液，⽴即游离，发⽣浑浊。规定0.25g药物中不得发⽣浑浊。
与⼀定试剂产⽣颜⾊反应① 盐酸吗啡中阿扑吗啡的检查② 盐酸吗啡中罂粟碱的检查③ 磷酸可待因中吗啡的检查④ 硝酸⼠的宁中马钱⼦碱的检查含量测定⾮⽔溶液滴定法：
⽣物碱类药物⼀般具有弱碱性，通常可在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，⽤⾼氯酸滴定液直接滴定，以指⽰剂或电位法确定终点。
⑴氢卤酸盐的滴定在滴定⽣物碱的氢卤酸盐时，⼀般均预先在冰醋酸中加⼊醋酸汞的冰醋酸溶液，使氢卤酸⽣成在冰醋酸中难解离的卤化汞，从⽽消除氢卤酸对滴定反应的不良影响。
加⼊的醋酸汞量不⾜时，可影响滴定终点⽽使结果偏低，过量的醋酸汞（理论量的1～3倍）并不影响测定的结果。
⑵硫酸盐的测定硫酸为⼆元酸，在⽔溶液中能完成⼆级电离，⽣成SO42-，但在冰醋酸介质中，只能离解为HSO4-，不再发⽣⼆级离解。因此，⽣物碱的硫酸盐，在冰醋酸的介质中只能被滴定⾄⽣物碱的硫酸氢盐。
硫酸阿托品的含量测定。溶剂：冰醋酸和醋酐，指⽰剂：结晶紫，滴定液：⾼氯酸。⾄溶液显纯蓝⾊。硫酸奎宁的含量测定。1摩尔的硫酸奎宁可消耗3摩尔的⾼氯酸。
硫酸奎宁⽚的含量测定。硫酸奎宁经强碱溶液碱化，⽣成奎宁游离碱，在与⾼氯酸反应，因此1摩尔的硫酸奎宁可消耗4摩尔的⾼氯酸。⑶硝酸盐的测定：
硝酸在冰醋酸介质中虽为弱酸，但是他具有氧化性，可以使指⽰剂变⾊，所有采⽤⾮⽔溶液滴定法测定⽣物碱硝酸盐时，⼀般不⽤指⽰剂⽽⽤电位法指⽰终点。如硝酸⼠的宁。⑷磷酸盐的测定：
磷酸在冰醋酸介质中的酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可按常法测定。磷酸可待因。
提取中和法提取中和法是根据⽣物碱盐类能溶于⽔⽽⽣物碱不溶于⽔的特性，可以采⽤有机溶剂提取后测定。碱化、提取、滴定。按下列任何⼀种⽅法处理后测定：
① 将有机溶剂蒸⼲，于残渣中加定量过量的酸滴定液使溶解，再⽤碱滴定液回滴剩余的酸；若⽣物碱易挥发或分解，应在蒸⾄近⼲时，先加⼊酸滴定液“固定”⽣物碱，再继续加热除去残余的有机溶剂，放冷后完成滴定。② 将有机溶剂蒸⼲，于残渣中加少量中性⼄醇使溶解，任何⽤酸滴定液直接滴定。
③ 不蒸去有机溶剂，⽽直接于其中加定量过量的酸滴定液，振摇，将⽣物碱转提⼊酸液中，分出酸液置另⼀锥形瓶中，有机溶剂层再⽤⽔分次振摇提取，合并⽔提取液和酸液，最后⽤碱滴定液回滴定。
测定条件的选择能使⽣物碱游离的碱化试剂有氨⽔、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钙和氧化镁等。但强碱不适⽤于下列⽣物碱类药物的游离：
① 含酯结构的药物，如阿托品和利⾎平等，与强碱接触，易引起分解。
② 含酚结构的药物，如吗啡，可与强碱形成酚盐⽽溶于⽔，难以被有机溶剂提取。
③ 含脂肪性共存物的药物，当有脂肪性物质与⽣物碱共存时，碱化后易发⽣乳化，使提取不完全。
因此氨⽔为最常⽤的碱化试剂。提取溶剂应具备下列条件：
① 与⽔不相混溶，沸点低，对⽣物碱的溶解度⼤，⽽对其它物质的溶解度应尽可能最⼩。② 与⽣物碱或碱化试剂不起任何反应。常⽤者为⼄醚和氯仿，其中氯仿应⽤更为⼴泛。
提取溶剂的⽤量通常应提取4次，第⼀次⽤量⾄少应为⽔液体积的⼀半，以后⼏次所⽤溶剂的体积应各为第⼀次的⼀半。如果⽔液体积很⼩时，第⼀次提取溶剂的⽤量则应与⽔液相等。
提取终点的确定取最后⼀次的提取液约0.5ml，置⼩试管中，加盐酸或硫酸（0.1mol/L）1ml，放⽔浴上将有机溶剂蒸去，放冷，滴加⽣物碱沉淀剂（如碘化铋钾试液等）1滴，⽆沉淀产⽣，即为提取已完全。指⽰剂的选择磷酸可待因⽚剂分析：
酸性染料⽐⾊法原理：在适当的pH介质中，⽣物碱类药物（B）可与氢离⼦结合成盐（BH+），⼀些酸性染料（如磺酸酞类的指⽰剂：溴麝⾹草酚蓝、溴甲酚绿等）在此介质中能解离为阴离⼦（In-），同时，阳离⼦和阴离⼦⼜能定量地结合成有⾊的离⼦对化合物，即离⼦对。
离⼦对被合适的有机溶剂提取后，形成有⾊溶液，可供⽐⾊测定。
影响定量分析的因素1.⽔相的最适pH值2.酸性染料的影响提取完全是提取常数和酸性染料阴离⼦的浓度密切相关的，⽽提取常数的⼤⼩由是与B-的种类和有机溶剂的选择密切相关的。⼀般⽤的有甲基橙、溴麝⾹草酚蓝（BTB）和溴甲酚绿等。3.有机溶剂的影响离⼦对提取常数的⼤⼩还与有机溶剂的性质有关。通常有机溶剂与离⼦对形成氢键的能⼒强，则提取效率⾼，如氯仿和⼆氯甲烷等具有中等程度的提取率，并且提取的选择性也较好，为最常⽤的有机溶剂。4.⽔分的影响有有机溶剂提取有⾊的离⼦对时，应严防⽔分的混⼊。
5.共存物的影响：⼀般赋形剂，重型、酸性⼄基弱碱性的物质均不⼲扰测定，强酸可改变染料溶液或缓冲液的pH，因⽽对测定有⼲扰。
以上五种影响因素中，⽔相的最适pH和有机溶剂对离⼦对的提取完全是酸性染料⽐⾊法的试验关键。应⽤与实例硫酸阿托品⽚剂紫外分光光度法利⾎平含量测定，注意避光操作。糖类和苷类药物单糖和双糖分⼦中有不对称碳原⼦，均具有⼀定的⽐旋度。
鉴别试验1.灼烧试验：糖类⽤直⽕加热，先熔融膨胀，后燃烧并发⽣焦糖臭，遗留多量的炭。蔗糖的鉴别可应⽤本试验。2.Fehling反应单糖或含有半缩醛基的双糖分⼦结构中，均有醛基或酮基，都具有还原性。Fehling反应是在碱性酒⽯酸铜试液（Fehling试液）中，糖将铜离⼦还原，⽣成红⾊的氧化亚铜沉淀。
葡萄糖的鉴别可⽤此反应（⽆⽔葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液和莪术油葡萄糖均⽤Fehling反应）蔗糖的鉴别：加硫酸煮沸，⽤氢氧化钠中和，再加碱性酒⽯酸铜试液，加热，⽣成氧化亚铜的红⾊沉淀。
葡萄糖和乳糖的杂质检查葡萄糖的⼀般检查项⽬：酸度、氯化物和硫酸盐；溶液的澄清度与颜⾊；⼄醇溶液的澄清度；亚硫酸盐与可溶性淀粉。
葡萄糖注射液中5-羟基糠醛的测定：紫外分光光度法。
乳糖的杂质检查：利⽤蛋⽩质类杂质遇硝酸汞试液产⽣的⽩⾊絮状沉淀，进⾏特殊杂质“蛋⽩质”的检查。原料药的含量测定：葡萄糖、乳糖和蔗糖不规定含量测定，规定⽐旋度的范围。制剂：葡萄糖注射液的含量测定：旋光度法。
测定中加⼊氨试液的作⽤：由于药⽤葡萄糖是D-葡萄糖，⽽D-葡萄糖有α和β两种互变异构体，因⽽药⽤葡萄糖是他们的混合物，⽐旋度相差甚远，⽽在⽔溶液中逐渐平衡，称作变旋。加热、加酸或加弱碱可加速平衡。计算因素1.0426的由来：
换算为含税葡萄糖浓度（c‘）时，则应为：
葡萄糖氯化钠注射液含量测定：硝酸银滴定法，每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于5.844mg的NaCl.加糊精溶液以形成保护，使氯化银沉淀呈胶体状态，则具有较⼤的表⾯，有利于对指⽰剂的吸附，有利于滴定终点的观察。
加硼砂溶液是为了增加pH值，因为本品pH值过低，⽽pH值低于3.5时，则五沉淀出现。加⼊2.5%硼砂溶液2ml后，溶液pH值为7，可促使荧光黄电离，以增⼤荧光黄阴离⼦的有效浓度，使重点变化敏锐。
苷类药物苷类为糖的衍⽣物（如氨基糖、糖醛酸等）与另⼀⾮糖有机化合物通过糖的端基碳原⼦连接⽽成的化合物。鉴别试验：
1.Keller-Kiliani反应α-去氧甲基五碳糖的反应α-去氧糖类，如洋地黄毒糖和磁⿇糖，是由糖类分⼦中与羰基相邻近
的“CHOH”基失去氧，转变为“CH2”后的结构。具有较⼤的活泼性，由α-去氧糖与苷元结合的⽣成物（即苷类）容易⽔解。将甾体强⼼苷溶于含有微量FeCl3（1滴9% FeCl3）的冰醋酸1～2ml中，沿管壁缓缓加⼊浓硫酸1～2ml，使成两液层。两液层交界⾯处显棕⾊（甲地⾼⾟显紫⾊）；醋酸层显蓝⾊或蓝绿⾊，放置1h后显靛蓝⾊。2.Kedde反应苷元的不饱和内酯侧链反应。
甾体强⼼苷元的C17上常有α-β或β-γ的不饱和内酯，即丁烯内酯，在碱性⽔溶液中易与芳⾹硝基化合物形成有⾊的络合阴离⼦。
Kedde反应⽤于去⼄酰⽑花苷的鉴别。
加⼄醇溶解后加⼆硝基苯甲酸试液与⼄醇制氢氧化钾试液各10滴，摇匀后，溶液即显红紫⾊。
3.⾊谱法① 纸⾊谱法：⽤于地⾼⾟的鉴别② 薄层⾊谱法：⽤于去⼄酰⽑花苷及其注射液的鉴别，采⽤硅藻⼟G薄层板。③ ⾼效液相⾊谱法：⽤于甲地⾼⾟及其⽚剂的鉴别特殊杂质的检查药物 特殊杂质 允许限量 检查⽅法洋地黄毒苷 洋地黄皂苷本品10mg溶于2ml⼄醇后，加胆甾醇的醇溶液，10min内，不得发⽣沉淀地⾼⾟ 洋地黄毒苷 6% 纸⾊谱法甲地⾼⾟ 有关物质5% ⾼效液相⾊谱法去⼄酰⽑花苷 有关物质 10% 薄层⾊谱法含量测定1.⽐⾊法：甾体强⼼苷元C17上的丁烯内酯部分是⾮常活泼的，很容易和芳⾹硝基化合物（如碱性三硝基苯酚试液）形成络合阴离⼦。所得络合物在可见光去具有特征的吸收峰（λmax为485～495nm）。
本法⽤于地⾼⾟、去⼄酰⽑花苷及其注射液的含量测定2.荧光法：利⽤L-抗坏⾎酸与过氧化氢等实际可使地⾼⾟或洋地黄毒苷产⽣荧光的原理，提⾼了定量分析的灵敏度，从⽽可⽤于每⽚含主药量分别仅为0.25mg和0.1mg的⽚剂的含量测定。地⾼⾟⽚含量，含量匀度（限度为20%），溶出度（限度为65%，转篮，100r/min，60min）甲地⾼⾟溶出度测定与地⾼⾟⼀样，限度规定相同。3.⾊谱法：
① 柱⾊谱法：⽤于洋地黄毒苷原料药测定的纯化处理② ⾼效液相⾊谱法：⽤于甲地⾼⾟及其⽚剂的含量测定，内标：洋地黄毒苷。
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