从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)

式之迟辟智美创作

一、目的

本法式用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测 的方法，以规范把持法式，保证检测数据的有效性. 二、适用范围：

本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保管的梯相关把持. 三、生物平安要求

标本及相应的致病菌把持必需在BSL-2生物平安实验室的生物平安柜中进行. 四、试剂及仪器设备

采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保管管 4.2 仪器设备

恒温培养箱、微生物鉴定仪 五、采样方法

5.1 标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子.肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采纳. 5.2 粪便标本：应收集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部份.盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，防止混入尿液、水和其他物质.

标本 ：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采纳肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，拔出肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周.以目测能见到粪便为准.拔出Cary-Blair运送培养基.

5.4 标本收集后立即送至实验室进行检测，若室温保管，不能超越1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检. 六、检验法式

粪便标本或肛子 XLD或麦康凯 SBG增菌 可疑菌落接种TSI和MIU XLD或显色平板 可疑菌落接种TSI和MIU 生化符合者做血清凝集和系统生化反应 生化符合者做血清凝集和系统生化反应 菌株保管管保管菌株上送

七、把持步伐

7.1 分别标识表记标帜一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）.

7.2 用1个无菌拭子取少量标本（不要使拭子 粘得太多，尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在XLD平板的第一区，接着把拭子放入SBG增菌液.再灭菌接种环在XLD平板的其余区进行划线接种.如果是Cary-Blair运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增菌液与平板.

7.3 所有培养基均放入36℃±1℃培养，SBG的最佳增菌时间是16～18h（建议每天下午4~5时接种标本，第二天早上8~10时用增菌液划平板）.

7.4 观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落. XLD平板可疑菌落观察：志贺菌在XLD平板上为粉红或无色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径1-2mm，而年夜部份的年夜肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径2-3mm.年夜大都沙门菌在XLD平板上中心黑色的透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落.（图2） 7.4.２YS平板可疑菌落观察：

7.4.３麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规

则、圆形菌落，直径2-3mm；年夜大都沙门菌为无色菌落，粉红色，带或不带黑心，伤寒沙门菌为无色菌落；而年夜部份的年夜肠杆菌类的菌落为粉红或红色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径3-4mm.

7.4.４ SBG肉汤增菌：SBG增菌16~18小时后，划线接种XLE平板或沙门显色平板，放入36℃±1℃培养18～24h.沙门显色平板可疑菌落观察：典范的沙门菌在沙门显色平板上为紫色的菌落，直径2-3mm.

建议的初步筛查方案（初步生化特征见表1）： 表１ 沙门菌、伤寒沙门菌、志贺菌及罕见肠道菌的初步生化特征

TSI（斜面） TSI（底面） TSI（H2S） TSI（产气） MIU（动力） 年夜部份 沙门菌 K（红色） A（黄色） +（黑色） +（气泡） +（弥漫 生长） -（黄色 圆环） -（黄色） 伤 寒 沙门菌 K（红色） A（黄色） 小部份 - +（弥漫 生长） -（黄色 圆环） -（黄色） 志 贺 氏 菌 K（红色） A（黄色） - - -（沿接种线生长） -（黄色 圆环） -（黄色） 年夜 肠 杆 菌 A（黄色） A（黄色） - +（气泡） +（弥漫 生长） +（加试剂变红色） -（黄色） 枸橼酸 杆菌 A（黄色） A（黄色） +（黑色） +（气泡） +（弥漫 生长） +（加试剂变红色） -（黄色） 变 形 杆 菌 K（红色） A（黄色） +（黑色） +（气泡） +（弥漫 生长） -（黄色 圆环） +（红色） MIU（吲哚） MIU（尿素） A：粪便（或肛拭子） SBG或SF增菌 XLD分离

接种TSI和MIU

B：粪便（或肛拭子） SBG或SF增菌 YS分离

接种TSI和MIU

C：粪便（或肛拭子） SBG或SF增菌 XLD和麦康凯分离 接种TSI和MIU

D：粪便（或肛拭子） SBG或SF增菌 YS和沙门显色分离 接种TSI和MIU

E：粪便（或肛拭子） SBG或SF增菌 XLD和沙门显色分离 接种TSI和MIU 7.5 生化初步鉴定

每个平板挑取3~5个分离较好的单个可疑菌落，分别接种到三糖铁（TSI）和动力-吲哚-尿素培养基（MIU），36℃±1℃培养18～24h.沙门菌和志贺菌的生化特征见表2.

7.6 系统生化试验

沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营养琼脂单，取单个菌落进行系统生化鉴定（可以使用APE20E或全自动生化鉴定系统进行）.

志贺菌血清学试验

.1挑取生化反应实筛符合志贺菌的营养琼脂斜面，首先用四种多价血清做玻片凝集反应(4种多价包括：A群1、2型；B群和D群).凝集者则用B群多价、D群和A1、A2、血清分别凝集.

.2若多价血清不凝集，可能为C群或A群的3～12型，

应进行C群的四种多价和A群另三种多价血清做玻片凝集.

沙门菌血清学试验

.1挑取生化反应实筛符合沙门菌的营养琼脂斜面，首先用A-F群O多价血清做玻片凝集反应.

.2若凝集可按罕见O因子检出频率，依照O4→O10→O9→O7→O8→O19→O2→O11顺序凝集.

.3 H抗原凝集

所有凝集阳性的菌落，都要同时用生理盐水做凝集试验，只有不呈现自凝时，才可以陈说阳性结果.

8 结果陈说

8.1 在初步生化鉴定符合后，可以先将可疑菌落进行革兰氏染色，最后综合生化及血清学结果，可以陈说检出（或未检出）沙门菌（或志贺菌）.

对从业人员体检结果已经纳入检验软件管理的单元，可以直接在检验软件中录入相应结果.

8.3 其他单元可以设计专门的陈说格式反馈给送检单元或送检科室，检验陈说中应至少包括姓名，性别，年龄，体检编号，检测结果.

8.4 检测结果为阴性，可以陈说为未检出肠道沙门菌和志贺菌；检测结果为阳性，根据检测情况陈说具体的型别.

8.5 检验部份应该保管所有受检样品的基本信息，检测到阳性标本，应该保管详细的检测记录，根据需要提供给送

检单元或科室，以及上级业务单元.

9 菌株的保管

对生化及血清学结果符合沙门菌或志贺菌的菌株用磁珠保管管保管菌种，放入-２０℃或-７０℃保管，依照相关要求上送菌株.