细菌鉴定册

真菌

酵母样真菌生化编码TH-15C·鉴定系统细菌名称

Candida albicansl.白色念珠菌1·Cr.1aurentii 罗伦隐球菌

ea.albieans2 白色念珠菌2 Cr.neofomans 新型隐球菌

Ca..boidinii .鲍狄尼念珠菌Cr.terreUs 地生隐球菌

&.cife.rrii 西弗念珠菌Cr.uniguttulatus 指甲隐球菌

Ca.colliculosa 软念珠菌Geot6chum capitatum 头状地霉

Ca.dubliniensis 督贝里念珠菌Ge.penicillamm 帚状地霉

Ca.famata 法码念珠菌Hansenula polymorpha 多形汉逊酵母

Ca.glabrata 光滑念珠菌,Kloeckera spp .克勒克氏酵母种类

Ca.guilliermondii 季也蒙念珠菌(高里氏)Pichia ohmeri 噢么毕赤酵母

Ca.kefyr 高加索乳念珠菌Prototheca wickerhamii 威克原壁酵母

Ca.krusei/inconspicua克柔氏/平常念珠菌Rhglutinis 粘红红色酵母

Ca.1usitaniae 葡萄牙念珠菌Rh.mucilaginosal 胶粘红酵母1

Ca.ma_g oliae 木篮念珠菌Rh.mucilaginosa2 胶粘红酵母2

Ca.norvegensis 挪威念珠菌Rh.minuta 小红酵母.

Ca.parapsilosis *滑念珠菌(副秃发) Saccharomyces cerevisiael酿酒酵母1

Ca.pellicuk~a 产膜念珠菌- Sa.cerevisiae2 酿酒酵母2

Ca.rugosa 皱落念珠菌(皱褶) Sporobolomyces salmonicolor赭色掷孢酵母

Ca.sphaeficai 球形念珠菌1 Trichospron.asahii 阿萨丝孢酵母

Ca.sphaerica2 球形念珠菌2 Tr.inkin 因凯丝孢酵母

Ca.tropi~alis 热带念珠菌Tr.mucoides 似粘丝孢酵母

Ca.utilis (效用念珠菌)

Ca.zeylanoides 桶形念珠菌(廷沫) .

Cr.albidus 白色隐球菌

Cr.humicolus 土生隐球菌

酵母样真菌生化编码鉴定系列TH-15C使用说明

一、检验程序:

(一)形态致病性酵母样真菌系一群呈酵母样菌落的单细胞芽生真菌。一般具有以下特征:

菌体为球形或卵圆形的真核单缎胞;以芽生形式进行繁殖;能形成假菌丝;菌落呈自色或无色透明,类似酵母菌。

临床上重要酵母及酵母样真菌

(二)分类:

对人类有致病性的真菌可依菌落形态区分为四群:

1.霉菌

可产生分技的丝状菌丝,这种丝状的真菌具有营养菌丝体,可伸入基质吸收养分,丽空中菌丝体,可从霉菌表面上生长使有性孢子得以散播。例如曲霉菌即属于此群。

2.酵母菌

此菌为单细胞真菌,呈圆形或卵圆形,以母细胞产生芽胞而繁殖,不形成有性孢子。当其生长

于固体培养基时,所形成的菌落与细菌菌落较为类似,不同于霉菌的粉状菌落。例如,面包酵母菌与臆球菌即属于此群。

3.酵母样真菌

生长成圆形或卵圆形细胞,以芽生繁殖,在固体培养基上产生类似葡萄球菌的菌落。例如念珠菌属即属于此群。

4.双形性真菌

为第四种形态的真菌群。其在37\"C的试管或组织上生长时,呈现酵母菌型,但在22\"C 培养时则呈菌丝体生长,故称为双形性真菌。例如组织胞浆菌即属于此群。其中产菌丝试验,应另外在玉米吐温80琼脂培养基上培养,置显微镜下观察,记录结果。

三、检索表的使用方法

待鉴定菌珠纯化后,以常规方法接种本系统所指定的15种生化管或15种同化试验板,经30\"C24—72小时(一般48小时),取出判读结果,查编码所代表的酵母菌菌名。

四、鉴定值(率):

表示某个菌的性状与分类单元之间的密切程度。

每个鉴定结果都有一个鉴定值。一个编码的四个鉴定结果,其前后排列次序是按其鉴定值的大小而定的。鉴定值大的排在前面。鉴定值是个百分数,其含意是:根据被鉴定菌株的生化反应模式得出的鉴定结果,其可信性在已知的44种酵母菌中所占的份数。当然此值越大,结果司信性越高。,五、符合机率:

细菌编码鉴定是利用计算机对细菌的生化反应模式进行分析。计算机鉴定细菌的理论基学是概率论,即计算一个特定的生化反应模式与已知的菌种模式有多大符合程度,其大小是用符合机率表示的。所以,符合机率是计算机鉴定中一个基本数据。符合机率在数值上总是小于l,其数值越大,表示该菌株的生化特征越典型。本编码表对每个鉴定都列出了符合机率以说明该菌株的反应模式与典型株的符合程度。一般最典型的菌株,符合机率在O.5左右。如果从表中检索出一个反应编码的符合机率很少,在O.001以下,尽管其鉴定值很高,但不属于典型菌株,比较少见。在附录二中列出了每个细菌最典型生化反应的编码,按符合机率大小排列为20个位次,绝大多数菌种,常见的反模式多为前6个。常规的鉴定工作中充分利用这部分资料,当检索编码得出鉴定结果后,再检索一下附录二中,看该编码在该鉴定结果中占第几位,如果在前10位,结果一般是可靠的。如果在lO位以后或未例在其内,说明该生化反应不典型。此时应该重复试验一次,证明该菌株是否确为非典型菌株。符合机率值太小,表示鉴定结果不很可靠。

六、注意事项:

1.本编码只限于酵母样真菌的鉴定.使用前应详细阅读使用说明,并严格按照要求操作。

2.T值——表示某个菌的性状与每一个分类单元的最典型反应之间的关系,即期望值。期望值在O~1之间,它与不典型试验成反比。

3.按鉴定率进行鉴定结果的质量评价及T值检验,包括以下4种情况:

最好的鉴定%id≥99.9 T≥0.75

很好的鉴定%id≥99.0 T≥O.5

好的鉴定%id≥99.0 T ≥O.25

尚可的鉴定%id≥80.0 T≥O

4.有些菌的鉴定结果,属于种的水平、属的水平或者识别力低时,要参照有关文献做进一步

检查,完成最后鉴定。

5.产菌丝试验:

应用玉米吐温80琼脂培养基作小培养(22℃湿盒),24~48小时后取出,置显微镜下观

察并记录结果。

葡萄球菌生化编码鉴定系列16S使用说明

一、检验程序

(一)葡萄球菌的生物学特性

葡萄球菌是革兰氏阳性球菌,成单、双或葡萄状排列。其代谢方式是呼吸兼发酵。触酶阳性,可利用多种碳水化合物,产酸.可产生细胞外酶。如血浆凝固酶等。多数菌为兼性厌氧菌,生长温度35℃~40℃。普通琼脂培养基,血琼脂培养基PH7.0~7.5,DNA的G+C含扑量30~40mol%,模式菌、金黄色葡萄球菌。

(二)葡萄球菌属的鉴别

临床常见标本如各种穿刺液、脓计、分泌液、脑脊液、胸腹水、血培养等经分离培养后再纯培养,取纯培养菌落,作生化特性鉴定及药敏试验。与微球菌科的鉴别,及人类葡萄球菌的鉴别试验见表l、表2和表3。与其它革兰氏阳性球菌的鉴别及有临床意义的8种葡萄球菌的关键性鉴定见表4和表5.

二16S鉴定系统的构成

本鉴定系统有以下16种生化试剂组成

尿素,蔗糖,精氨酸水解,木糖,乳糖,甘露醇,木醇,麦芽糖,乙酰葡糖胺,硝酸盐还原,蜜二糖,果糖,VP,山梨醇

这16项生化试剂是区别葡萄球菌属内各个菌种所必须的。由于是在众多的生化项目中精选出这16项特异的试验,使本系统有较好的鉴别能力,基本上不须在加其它补充试验就可以把19种细菌相互区分鉴定到种。

三、检索表的使用

待鉴定的菌种纯化后,以常规方法接种本系统所指定的16种生化培养基,经35℃18-24h后判定结果。将各项生化反应之结果得出的相应编码,本系统共16项生化反应,的到的编码是一个六位数字,查检索编码表,便可得到鉴定结果。

四、鉴定值【翠):

表示某个菌的性状与分类单元之间的密切程度。

每个鉴定结果都有一个鉴定值。一个编码的四个鉴定结果,其前后排列次序是按其鉴定值的大小值而定的。鉴定值大的排在前面。鉴定值是个百分数。其含意是:根据被鉴定菌株的生化反应模式得出的鉴定结果,其可信性在已知的19种细菌中所占的份数。当然此值越大,结果可信性越高。

五、符合机率:

细菌编码鉴定是利用计算机对细菌的生化反应模式进行分析。计算机鉴定细菌的理论基础是概率论,即计算一个特定的生化反应模式与已知的菌种模式有多大符合程度。其人小是用符合机率表示的。所以,符合机率是计算机鉴定中一个基本数据。符合机率在数值上总是小于l,其数值越大。表示该菌株的生化特征越典型。本编码表对每个鉴定都列出了符合机率,以说明该菌株的反应

模式与典型株的符合程度。一般最典型的菌株。符合机率在0.5左右。如果从表中检索出一个反应编码的符合机率很少,在0.00l以下,尽管其鉴定值很高.但不属于典型菌株,比较少见。在附录二中列出了每个细菌最典型生化反应的编码,按符合机率大小排列为20个位次,绝大多数菌种,常见的反模式多为前6个。常规的鉴定工作中充分利用这部分资料,当检索编码得出鉴定结果后.再检索一下附录二中,看该编码在该鉴定结果中占第儿位,如果在前10位。结果一般是可靠的。如果在10位以后或未例在其内,说明该生化反应不典型。此时应该重复试验一次,证明该菌株是否确为非典型菌株。符合机率值太小,表鉴定结果不很可靠。

六注意事项:

1.本编码只限于葡萄球菌属细菌的鉴定,使用前应该详细阅读使用说明,并严格按照要求操作。

2.T值—表示某个菌的性状与每一个分类单元的最典型反应之间的关系。即期望值。期望值在0-1之间,它与不典型试验成反比。

3.按鉴定率进行鉴定结果的质量评价及T值检验,包括以下4种情况:

最好的鉴定%id≥99.9 T≥0.75

很好的鉴定%id≥99.0 T≥O.5

好的鉴定%id≥99.0 T ≥O.25

尚可的鉴定%id≥80.0 T≥O

4.有些菌的鉴定结果,属于种的水平或者识别力低时。要参照有关文献做进一步检查,完成最后鉴定。

弧菌

二、GYZ一9 V鉴定系统的构成

本鉴定系统由九项生化试验组成,分别是:赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、葡萄糖产气、蔗糖、甘露醇、水杨苷、6%氯化钠和枸橼酸盐。这九项生化试验是区别弧菌属、气单胞菌属和邻单胞菌属以及每个菌属内各个菌种所必须的。由于是在众多的生化项目中精选出这九项恃异的试验,使本系统有较好的鉴别能力,基本上不须再加其它补允试验就可以把20种细菌相互区分开鉴定到种。在鉴定一株细菌之前必须确认该菌为弧菌科而不是肠杆菌科,否则鉴定结果将出现错误。格据定义,弧菌科的细菌为发酵型代谢,氧化酶阳性。因此,在用本系统鉴定细菌之前,须先做氧化一发酵(OF)试验和氧化酶试验。此时必须意识到一点,弧

菌属中的梅氏弧菌例外,为氧化酶试验阴性,须予以区别对待。OF试验结果的判定及氧化酶试验的鉴别意义见表1.2。

三、检索编码表的使用方法:

待鉴定的菌株纯化后,以常规方法接种本系统所指定的各种生化培养基,经35℃过夜孵育后判断结果。将反应结果记录在如下的鉴定单上,并按照所示的万法记取由反应结果得出的相应编码。本系统共九项生化反应,得到的编码是一个三位数字,查除索编码表,便可得到鉴定结果。

编码表由四项内容组成,即编码、鉴定结果、鉴定值、符合机率。本编码表,每个编码一般给出四个鉴定结果,其中往往第一个是正确的鉴定,可作为最后的结果,有的情况还须进一步分析(下而继续说明)。给出四个鉴定结果的目的是为使实验者了解一个特定的生化反应模式,除了与最可靠的鉴定结果符台外,尚与哪几个菌种有一定的相似性,便于进一;多分析判断.使结果更为可靠。

四、鉴定值:

每个鉴定结果都有一个鉴定值。一个编码的四个鉴定结果,其前后排列次序是按其鉴定值的大小而定的。鉴定值大的排在前面。鉴定值是个百分数,其含意是:格据被鉴定菌株的生化反应模式得出的鉴定结果,其可信性在已知的20种细菌巾所占的份数。当然,此使越大,结果可信性越高。表中给出的四个鉴定结果是20种细菌鉴定中可信性高的前四个,其它可信性较低,实际意义不大。尽管给出了前四个,大多数情况下只有第一个才有实际意义,例

如:

533 霍乱弧菌98.72%

拟态弧菌0.95%

梅氏弧菌O.13%

致伤弧菌0。13%

由于第一个菌种的鉴定值为98.72%,其它19个菌种的可能性共计只有1.26%。所以只有第一个鉴定结果是最可靠的。

另外一种情况是几个鉴定结果的鉴定值相互接近,例如:

020 梅氏弧菌44.26%

霍利斯弧菌43.24%

海鱼弧菌lO.76%

温和气单胞菌O.99%

对于这种情况要进~步分析。简便的方法是参照附录一中列出弧菌科各菡属鉴别表。

根据已知的生化反应绩果,对照各种菌属的鉴别表,即可将几个较相似的结果鉴别开,最终得到一个正确的结果。

五、符合机率:

细菌编码举定是利用计算机对细菌的生化反应模式进行分析。计算机鉴定细菌的理论基础是概率论,即计算一个特定的生化反应模式与已知的菌种模式有多大符合程度,即大小是用符合机率表示的。所以,符合机率是计算机鉴定中一个基本数据。符合机率在数值上总是小于1,其数值越大,表示该菌株的生化特征越典型。本编码表对每个鉴定都列出了符合机率,以说明该菌株的反应模式与典型菌株的符合程度。一般最典型的菌株,符合机率在0。5左右。如果从表中索出一个反应编码的符合机率很少,在O.001以下,尽管其鉴定值很高,但不属于典型菌株,比较少见。在附录二中列出了每个细菌最典型生化反应的编码,按符合机率大小排列为20个位次,绝大多数菌种,常见的反应模式多为前6个。常规的鉴定工作中充分利用这部分资料,当检索编码得出鉴定结果后,再检索一下附录二中,看该编码在该鉴定结果中占第几位,如果在前10位,结果一般是可靠的。如果在10位以后或未例在其内,说明该生化反应不典型。此时应该重复试验一次,证明该菌株是否确为非典型菌株。符台机率值太小,表量鉴定结果不很可靠。

六、注意事项:

1.本编码只限于弧菌科细菌的鉴定,使用前应详细阅读使用说量,并严格按照要求操作。

2.鉴定结果为霍乱弧菌时,应做血清凝集试验,凝集者为0一l群霍乱弧菌,不凝集者为非0一l群霍乱弧菌(V.ch01erae non-O1,过去称NCV或NAG的Heiberg氏I或Ⅱ群菌株)。

非发酵

一、本编码的构成及使用方法

本系列由15项生化反应试验构成,分别是精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、枸橼酸盐、硝酸盐、

尿素、七叶苷、靛基质、0NPG、蔗糖、表芽糖、木糖、H2S、葡萄糖、氧化酶。组合形式如图所示。

鉴定值03063 鉴定结果脲巴斯德氏菌

使用时,按系列指定的项目做15项生化反应试验,将反应结果(阳性或阴性)填入图中每个项目的下方。每项反应均有一个数值。记下阳性项目下的数值,然后将每3个项目一组的阳性数值相加,可得到一个不大于7的数值。15项反应共分5组,可得到一个由5位组成的数值,即为鉴定值。检索编码本,该数值所对应的细菌名称即为鉴定结果,上图示意了使用过程。

二、检索编码岫的组成

检索编码册是编码鉴定的工具。因篇幅所限,本编码册包含三项内容:①编码,②鉴定结果,

③鉴定机率。

1.编码由5位数组成,一个编码表示细菌的一种反应模式。来源见前述。

编码系8进制数字,从00000起至77777止,从小到大排列。检索时可依此顺序查找。每种细菌的生化反应模式是相对特异且稳定的,其编码数字也是相对固定的。对不存在的细菌生化反应模式也没有相应的编码。所以,本编码册中的编码是不连续的。如果在实际工作中遇到查不到编码时,应从三个方面考虑:①生化反应做得不对;②如果经重复生化反应结果正确,可确定为非典型菌株(指主要的生化特性不符);③新的菌种而本编码尚未收入对后两种情况,作最终鉴定仅靠常规的方法尚不够,须进行更多的项试验进一步确认,并应送有经验的实验室给予证实。

2.鉴定结果与每个编码相对应的有1~3个细菌名称,是该编码的鉴定结果。绝大多数编码,只有1个鉴定结果,使用时不会产生问题。部分编码有2个结果,个别编码有3个结果(即重码),这类情况不可仅依2个或3个细菌名的排列次序决定选哪一个,而必须分析该细菌的15项生化反应结果,与生化反应表中相应的几个菌种对比,看与哪个最符合,甚至还要补做个别试验才可最后得到结果。

本编码册重码多出现在不同菌属间。如编码06000,对应细菌名为:醋酸钙不动杆菌(洛非)和产硷假单胞菌。要确定哪个结果正确,须做鞭毛染色,借鞭毛的性质来区分。各菌属相

互区别的主要特征见表①。借助表①,可解决大部分重码问题,但个别属于相同菌属的重码,须参考有关资料做相应区别,应该意识到,不少菌属内各菌种的生化反应极为相似,甚至不能用生化反应相互鉴别。这是非发酵菌的一个特点。

3.机率编码册中,每一个细菌名后均有一个数,其值不大于1,绝大多数为小数。此数值称鉴定机率或符合机率。表示该编码所代表的生化反应模式与该种细菌的典型生化反应模式的符合程度。数值越大,符合程度越大,并表明其反应模式越典型。如编码(X)000,鉴定结果为醋酸钙不动杆菌,机率为O.5344,说明这种反应的菌株是很典型的。编码03000,鉴定结果也是醋酸钙不动杆菌,机率为0.0008,其数值很小,说明这种反应的菌株很不典型。在临床标本中,典型的菌株较常见,不典型的菌株不常见。因此,分离到的醋酸钙不动杆菌,其编码多为00000。

在本手册中,有时重码中的两个细菌或三个细菌的符合机率均很高。如06001,嗜酸假单胞菌为0.9212,脱硝产碱杆菌为0.748,都是非常典型的生化模式。不能选择一个大的作为鉴定结果,而必须进一步鉴别,方法见前述。

三、使用注意事项

因非发酵菌生化反应不甚活泼,而且比较迟缓。有些反应,如脱羧酶试验,糖分解试验须连续2—3天,结果才可靠。脱羧酶试验和糖分解试验应同时加做对照,并用正确的方法判断结果。

否则,发生错误鉴定的情况会增加,甚至出现查不出码的现象。

肠杆科

二、肠杆菌科细菌生化编码鉴定检索表使用说明

(一)构成

本系列由15项生化项目组成.鉴定肠杆菌科中常见73的种细菌。所用的15项生化特性为:硫化氢、苯丙氨酸、匍萄糖酸盐、靛基质、甲基红、枸橼酸盐、尿素、动力、产气、赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖。其中产气可以在双糖铁或三糖铁培养基上观察。以上述生化反应结果。查对编码检索表。

(二)使用方法

在使用本系列鉴定细菌之前,先确次该菌为氧化酶阴性,发酵葡萄糖,符合肠杆菌科定义。然后按常规法做上述15项生化反应。

根据生化反应结果,在鉴定单每个试验项目下方的结果一栏中填写“+”或“一”,15项反应逐个填写,再在单值一栏中圈取反应为阳性的试验项目的数字。将每组中被圈取的数字相加的和写征总值一栏中。这样,共5个组的各3个项目的反应结果,就由一个五位数字的总值表示出来。此值即为鉴定值,查检索表得到鉴定结果,编码的检索方法举例见鉴定单。

在此例中,鉴定总值为15157,查检索表,得鉴定结果为催产克雷白氏菌。编码表中的数字是00000∽77777的大小顺序排列的。查找时.按鉴定值的人小顺序查找与鉴定值完全

相同的一个数字.即得细菌名称。

在使用本编码时,并不是所有的编码均有鉴定结果。这是因为有些生化反应模式不可能出现或目前尚未认识有这样的菌种。本系列在没计时,以删繁就简为原则,在项目的排列上以合理为最佳选择。在使用时,如发现查不到鉴定结果,首先要确定反应结果是否正确无误,可重复做一次。如果试验没有问题,应考虑该菌是否为非典型菌株或少见菌株,甚至发现新菌种的可能。