电泳缓冲液TAE,TBE之五兆芳芳创作
缓冲液在电泳进程中的一个作用是维持适合的pH.电泳时正极与负极都会产生电解反响,正极产生的是氧化反响(4OH4e>2H2O+O2),负极产生的是复原反响(4H++4e>2H2),长时间的电泳将使正极变酸,负极变碱.一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力,是溶液两极的pH保持根本不变.
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性,以利于DNA份子的迁移,例如,一般电泳缓冲液中应含有0.010.04mol/L的Na+离子,Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢;太高时就会造成过大的电流使胶发烧甚至熔化.
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA,参加浓度为12mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等离子,避免电泳时激活 DNA酶,此外还可避免Mg2+离子与核酸生成沉淀.
TAE是使用最普遍的缓冲系统.其特点是超螺旋在其中电泳时更适合实际相对份子质量(TBE中电泳时测出的相对份子质量会大于实际份子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的别离效果,此外,收受接管DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳.TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如留宿)不成选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到互换.
TBE的特点是缓冲能力强,长时间电泳时可选用TBE,并且当用于电泳小于1kb的片段时别离效果更好.TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的收受接管率下降,所以不宜在收受接管电泳中使用.
TPE的缓冲能力也较强,但由于磷酸盐易在乙醇沉淀进程中析出,所以也不宜在收受接管DNA片段的电泳中使用.
50×Tris乙酸(TAE)缓冲液 终浓度配制1L溶液
成分 各成分的用量
2mol/L Tris碱 242g
1mol/L 冰乙酸 57.1 ml
EDTA (pH=8.0) 0))
水 18.622g (200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.补足1L
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