食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的高效液相色谱法测定

作者：高云

来源：《科技创新导报》 2013年第17期

高云

（白城市产品质量检验所 吉林白城 137000）

摘要：用高效液相色谱法定量测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量表明，该方法的优势在于高速、高效、高灵敏度，数据准确，计算结果操作简单，计算方便。

关键词：高效液相色谱法 食醋 酱油 苯甲酸钠 山梨酸钾 定量测定

中图分类号：O65 文献标识码：A 文章编号：1674-098X(2013)06(b)-0124-01

苯甲酸钠和山梨酸钾是食醋和酱油生产中常用的防腐剂，前者用量过多会对人体肝脏产生危害，甚至产生致癌作用；掺有碳酸钾的山梨酸钾产品，在存放3个月之后，颜色会变成黄色或棕色，一些不法企业在伪劣产品中添加化工原料增白剂，以增加产品的白度、掩盖劣变后产生的黄色，化工增白剂会对人体的健康产生严重的危害。采用RP-HPLC法定量测定食醋和酱油中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量，结果表明该方法简便，快速，值得推广应用。

1 仪器、试剂与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪，电子天平，Milli-Q超纯水处理器，2XZ-1型旋片真空泵，超声波清洗机。

1.2 试剂

甲醇（色谱纯），稀氨水（1+1）、碳酸氢钠（优级纯，纯度99.5%），苯甲酸钠（AR，纯度99.5%）山梨酸钾（AR，纯度98.0%）。

1.3 方法

采用RP-HPLC法，色谱柱C18不锈钢柱150mm，流动相为甲醇：乙醇胺（0.02mol/L），流速1.0ml/min，柱温为30℃，波长230nm。

将量取待测样品10ml放入小烧杯中，温热，搅拌去除二氧化碳。加（1+1）氨水调价pH值约为7，加水定容至50ml。使用前取1～2ml于小离心管中12000rpm离心，上清液经滤膜（0.45）过滤后进样，准备上机分析。

开泵20min，开检测器，进样分析，进样顺序，先洗针，用有机水洗6次以上，再用水洗6次以上，吸样时针内不可有气泡，Load位置注入，Inject进样，保持针不动1min，取标准进样量2.5、5、7.5、10、15μl，酱油、醋各5μl，1次加入高效液相色谱仪，记录色谱图，分析实验数据。操作过后关检测器，冲洗仪器，关输液泵。

2 结果

2.1 工作曲线的制作

苯甲酸钠标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸钠，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至刻度，此溶液中苯甲酸钠含量为1mg/ml，作为储备溶液。

山梨酸钾标准储备溶液：准确称量0.1000g山梨酸钾，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5ml，加热溶解移入100ml容量瓶中，加水定容，此溶液中山梨酸钾含量1mg/ml，作为储备溶液。

实验结果见表1。经计算，山梨酸钾的线性回归方程为y=23146x+15847，r2=0.9894；山梨酸钾的线性回归方程为y=39493x+26613，r2=0.9890。

表1为标准进样量(μl)与峰面积对应表。

2.2 样品中苯甲酸钠和山梨酸钾含量

对于食醋样品，进样量为5μl，苯甲酸钠的保留时间为2.707min，峰面积为27681.107，最终计算得到的含量为5.113×10-4μg；山梨酸钾的保留时间为3.532min，峰面积为36692.711，最终计算得到的含量为2.552×10-4μg。

对于酱油样品，进样量为5μl，苯甲酸钠的保留时间为2.732min，峰面积为29757.432，最终计算得到的含量为6.010×10-4μg；山梨酸钾的保留时间为3.657min，峰面积为72356.148，最终计算得到的含量为11.583×10-4μg。

2.3 理论塔板数、分离度和选择因子的计算

标准溶液中苯甲酸钠的保留时间为2.707min，峰宽为0.17min，理论塔板数为4056.9406，分离度为1.5171，选择因子为1.1055；山梨酸钾的保留时间为3.532min，峰宽为0.25min，理论塔板数为3193.6061，分离度为1.1251，选择因子为1.1156。

食醋中苯甲酸钠的保留时间为2.707min，峰宽为0.23min，理论塔板数为2216.3626，分离度为1.5525，选择因子为1.5500；山梨酸钾的保留时间为3.532min，峰宽为0.41min，理论塔板数为1187.3907，分离度为1.1733，选择因子为1.1507。

酱油中苯甲酸钠的保留时间为2.732min，峰宽为0.25min，理论塔板数为1913.7389，分离度为1.5820，选择因子为1.1615；山梨酸钾的保留时间为3.657min，峰宽为0.43min，理论塔板数为1157.2654，分离度为1.2529，选择因子为1.1207。

3 结语

本实验观察表明：①色谱图中有些峰有轻微的拖尾现象，产生的原因可能为系统内的死体积大，色谱柱上有样品吸附。操作中，应尽量降低流动柱管线的死体积降低到最低程度，流动相洗脱更强。②由于色谱柱老化、流动相或色谱柱被污染造成保留时间漂移现象等原因，致使保留时间有逐渐减小的趋势。③从标准曲线看出，样品进样量和峰面积呈明显线性关系，决定系数较高。

实验表明：苯甲酸钠分离度在食醋和酱油中分别为1.5525和1.5820，山梨酸钾分离度在食醋和酱油中分别为1.1733和1.2529，分离度都在1.5左右波动，证明分离程度较为理想，表明选择性和柱效处于较高水平。

从计算结果看：①测量时样品的理论踏板普遍偏小，说明柱效不好。可将移动相的流速降低到适宜程度，固定相及其颗粒度减少到适宜量，选用移动相粘度较低，适当提高柱温，尽量减小停滞移动相的体积等，达到提高柱效的目的。同时，还应注意检查流动相是否被污染，这也是导致柱效不好的因素之一。②选择因子很小，说明柱的选择性和分离度均较差。同理，可以通过改变固定相和流动相的性质和组成，降低柱温，改用四元高压梯度洗脱等方法，达到逐步提高选择性和分离度之目的。③平行测定的数据存在误差，其主要来源为人员误差、操作误差和仪器误差，应采取适当的措施，将误差降低到最低程度。

高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点。所以，最终计算得到的数据较为准确，计算结果操作简单，计算方便，从而得出样品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量。

参考文献

[1]王瑾,王平,雷纯阳.高效液相色谱法测定酱油、醋中苯甲酸钠[J].中国现代医生，2008，46（26）：114-115.

[2]唐海霞，杨美成.高效液相色谱外标法测定药品含量的不确定度评定[J].现代测量管理与实验管理，2006（4）：41-42.

[3]刘渭萍，李明，孙蕊.高效液相色谱法快速测定酱油、醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾[J].辽宁化工，2004,33(7):422.

[4]袁黎明.制备色谱技术及应用[M].北京：化学工业出版社，2005.