蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测

℃恒温装置中放置10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。

生反应。

二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。

方法一 快速卡法

瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.

胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37

生反应。

1、整体测定法

四、实验步骤：

三、实验试剂：

二、实验原理：

2、表面测定法（粗筛法）

1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；

中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。

注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。

（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。

实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测

（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）

一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。

类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品

（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发

（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发

（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖

（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。

2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸

（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。预反应10

1、结果判断

五、检测结果判断：

氧化乐果农药名称

2.32.03.11.71.7

马拉硫磷

水胺硫磷

对硫磷

甲氨磷

合率应在80%以上。

检出限（mg/kg）

对阳性结果的样品，可用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。

乐果农药名称

六、实验注意事项及说明：

1、速测卡灵敏度指标如下表所示。

色或与空白对照卡相同，为阴性结果。

2、样品检测结果记录并对检测结果进行评价。

敌百虫

部分农药检出限参考表

检出限（mg/kg）

0.3

农药名称好年冬

251.02.5

甲萘盛久效磷

0.33.5

敌敌畏

乙酸甲胺磷

注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。

1.3

呋喃丹

0.5

些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提法，减少色素的干扰。

结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。

检出限

（mg/kg）

长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指（体温）捏3min时可以变蓝，即可往下操

4、当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延

的原因：一是药片表面缓冲溶液加得少、预反应后的药片表面不够湿润；二是温度太低。

与空白对照卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。白色药片变为天蓝

作。注意样品放置的时间应与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色

质，容易产生假阳性，处理样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一

2、速测卡法符合率：在检出的30份以上阳性样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符

3、葱、蒜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物

5、红色药片与白色药片叠合反应的时间以3min为准，3 min后的蓝色会逐渐加深，24h后

馏水中。

（一）试剂

（二）仪器

二、实验原理：

颜色回逐渐退去。

2、天平（0.01g）；

方法二 酶抑制率法（分光光度法）

根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性原理，向蔬菜的提取

三、实验试剂和仪器：

注意实验过程的操作要点。

液溶解，4℃冰箱保存。

3、恒温水浴或恒温培养箱。

在0~5℃下保存。保存期不超过2周。

1、分光光度计或相应的农残快速检测仪；

菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留量的情况。

值应控制在0.3以上。摇匀后在0~5℃冰箱中保存，保存期不超过4天。

5、可选用由以上试剂配置的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。

酶的活性被抑制，底物就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。用分光光

解产物与加入的显色剂反应产生黄色物质。如果蔬菜的提取液含有农药并残留量较高时，

酸酯类农药残留或残留量低，酶的活性就不被抑制，实验中加入的底物就能被酶水解，水

液中加入生化反应底物碘化乙酰硫代胆碱和乙酰胆碱酯酶，如果蔬菜不含有机磷或氨基甲

一、目的要求：学习酶抑制率法测定果蔬有机磷和氨基甲酸脂类农药残留的原理和方法，

度计在412nm处或农药残毒快速检测仪测定吸光值，根据计算出的抑制率，就可以判断蔬

2、乙酰胆碱酯酶（实验专用酶） 根据酶活力用缓冲溶液溶解，3 min的吸光值变化ΔA0

3、底物碘化乙酰硫代胆碱 称取25.0 mg碘化乙酰硫代胆碱，用3.0 mL缓冲溶液溶解，

1、pH8.0缓冲液 分别称取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，溶解于1000 mL蒸

4、显色剂 分别称取160 mg二硫代二硝基苯甲酸和15.6 mg碳酸氢钠，用20 mL缓冲溶

1、样品处理

检验结果记录：

五、结果计算：

四、实验步骤：

2、对照溶液测试

3、 样品溶液测定

六、实验结果判断：

光度的变化值ΔAt。

样品名称

色反应，应立即放入比色皿中，记录反应3 min的吸光度的变化值ΔA0。

放置15 min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.1 mL低物摇匀，此时检液开始显

甲酸酯类农药残留，可判定样品为阳性结果，对检验结果阳性的样品需重复检验两次以上。

七、实验注意事项及说明出提取液，静置3~5 min，待用。

抑制率（%）=

ΔA0

A0At100A0ΔAt

式中 ΔA0——对照液反应3 min吸光度的变化值；

ΔAt——样品溶液反应3 min吸光度的变化值。

选取有代表性的蔬菜样品，去掉不可食部分后称取蔬菜试样，冲洗掉表面泥土，剪成

1 cm左右碎片。取样品1 g，放入烧杯或提取瓶中，加入5 mL缓冲液，振荡1~2 min，倒

先于试管中加入2.5 mL缓冲液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL显色剂。摇匀后于37 ℃

先于试管中加入2.5 mL样品提取液，其他操作与对照测定相同，记录反应3 min的吸

当蔬菜样品提取液对酶的抑制率大于50% 时，表示样品中有高剂量的有机磷或氨基

抑制率

（%）

检验结果

八、思考题

甲胺硫辛硫磷对硫磷敌敌畏马拉硫磷

4.02.00.31.00.1

农药名称乐果

3.0

检出限（mg/kg）

1、使用速测卡的注意事项有哪些？

氧化乐果农药名称丁硫克百威甲基异柳磷呋喃丹敌百虫灭多威

2、酶抑制率法对部分农药的检出限为：

2、影响胆碱酯酶抑制检测法的因素有哪些？如何解决？

0.20.15.00.80.050.05检出限（mg/kg）

长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白对照测试的吸光度变化

5、该法适用于大量蔬菜样本的筛检，不适用于最后的仲裁检测。

3、可用何种检测方法对检验结果为阳性样品，进行进一步的定性和定量？

些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提法，减少色素的干扰。

1、对检验结果阳性的样品，需用其他方法进一步确定残留农药的种类和进行定量测定。

4、当温度条件低于37℃，酶反应速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间也应相对延

ΔA0在0.3以上为准。注意样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。酶

质，容易产生假阳性，处理样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一

3、葱、蒜、萝卜、韭菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物

的活性不够和温度太低都可能造成胆碱酯酶空白对照液3 min的吸光度ΔA0变化值＜0.3。