QIAcube小型工作站在生物接触类检材提取中的应用研究

别辛技术　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　２０１５年第４０卷第２期　・论　著・　ＤＯＩ：１０．１６４６７￣．１００８—３６５０．２０１５．０２．００８　ＱＩＡｃｕｂｅｄ￣型工作站在生物接触类检材提取中的应用研究　徐韩飞，范京来，富渭鑫，陈立彰，尤汉杰　（温州１市公安局刑科所，浙江温州３２５０００）　ＱＩＡｃｕｂｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　Ｔｏｕｃｈ　ＤＮＡ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ＸＵ　Ｈａｎ－ｆｅｉ，ＦＡＮ　Ｊｉｎｇ—ｌａｉ，ＦＵ　Ｗｅｉ—ｘｉｎ，ＣＨＥＮ　Ｌｉ—ｚｈａｎｇ，ＹＯＵ　Ｈａｎ－ｊｉｅ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＦｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ　Ｐｕｂｌｉｃ　ＳｅｃｕｒＲｙＢｕｒｅａｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｗｅｎｚｂｏｕ　３２５００ｇ　Ｃｈｉｎａ）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＱＩＡｃｕｂｅ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃｓ　Ｃａｓｅｗｏｒｋ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｏｕｃｈ　ＤＮＡ　ａｎｄ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　３０　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｕｓｉｎｇ　ｔａｐｅ—ｌｉｆｔｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，３０　ｓａｍｐｌｅｓ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｂｙ　ｙａｍｓ　ａｎｄ　３０　ｓａｍｐｌｅｓ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｄｏｕｂｌｅ　ｓｗａｂ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ａｌｌ　ｔｈｅｓｅ　９０　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ＱＩＡｃｕｂｅ，ＥＺ１　ａｎｄ　ＳｉＯ２　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｎ　ｑｕａｎｔｉｉｆｅｄ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＳＴＲ　ｔｙｐｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｕｐ　ｔｏ　４４．４％ｔｏｕｃｈ　ＤＮＡ　ｗｅｒｅ　Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＱＩＡｃｕｂｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ．ｗｉｔｈ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　５６．７％ｉｎ　ｔａｐｅ．１ｉｔｆｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ．４６．７％ｉｎ　ｙａｍｓ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　３０．０％ｉｎ　ｄｏｕｂｌｅ　ｓｗａｂ　ｇｒｏｕｐ．Ｂｏｔｈ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔａｐｅ　ｌｉｆｔｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｙａｍｓ　ｇｒｏｕｐ　ｇｏｔ　ｇｏｏｄ　ＳＴＲ　ｔｙｐｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｕｓｉｎｇ　ＱＩＡｃｕｂｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｓｗａｂ　ｇｒｏｕｐ．ＱＩＡｃｕｂｅ　ａｎｄ　ＳｉＯ２　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｇｏｔ　ｇｏｏｄ　ＳＴＲ　ｔｙｐｉｎｇ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ａｔ　ｔｈｅ　ｌａｒｇｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｌｏｃｉ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ＤＮＡ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ＥＺ１　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｕｐ　ｔｏ　４４．４％ｔｏｕｃｈ　ＤＮＡ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＱＩＡｃｕｂｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ＳｉＯ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　４３．２％ａｎｄ　ｔｈｅ　ＥＺ１　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ　２６．９％．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ＤＮＡ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０ＩＡｃｕｂｅ　ａｎｄ　ＳｉＯ，ｓｙｓｔｅｍ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｂｏｔｈ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ＥＺ　１　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　０ＩＡｃｕｂｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｓ　ａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１　ｅｖｉｄｅｎｃｅ．ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ　ｉｎｔｏ　ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｐｒａｃｔｉｃｅ．　ＫＥＹ　ＷｏＲＤＳ：ｆｏｒｅｎｓｉｃ　ｇｅｎｅｔｉｃｓ；ＯＩＡｃｕｂｅ；ＥＺ　１：ｓｉｌｉｃｏｎ　ｂｅａｄ—ｂａｓｅｄ　ｍｅｔｈａｌ；ｔｏｕｃｈ　ＤＮＡ　ｓａｍｐｌｅ　摘要：目的探讨ＱＩＡｃｕｂｅ工作站在生物接触类检材中的提取效果。方法将９０份以脱落细胞粘取膜、实物样　本（纱线转移）或棉签擦拭物为载体的生物接触类检材，分别采用ＱＩＡｃｕｂｅ工作站、ＥＺ１工作站和手工硅珠法　进行基因组ＤＮＡ提取、定量并检测１５个常染色体基因座的ＳＴＲ分型。结果利用ＱＩＡｃｕｂｅ工作站提取的生物　接触类检材平均检出率达到４４．４％，其中脱落细胞粘取膜组检出率为５６．７％，实物纱线转移组检出率为４６．７％，　棉签擦拭物组检出率为３０．０％。脱落细胞粘取膜组和实物样本（纱线转移）组均获得较好的ＳＴＲ分型结果，所　得ＤＮＡ浓度均优于棉签擦拭物组样本。ＱＩＡｃｕｂｅ工作站组平均检出率为４４．４％，手工硅珠法组平均检出率为　４３．２％，而ＥＺ１工作站组平均检出率为２６．９％，前两者平均检出率明显高于ＥＺ１工作站组。ＱＩＡｃｕｂｅ工作站组　与硅珠法组所得ＤＮＡ浓度无显著差异，但均明显高于ＥＺ１工作站组。ＱＩＡｃｕｂｅ工作站组与硅珠法组检测得到　的ＳＴＲ分型ＲＦＵ值及峰值均衡性均优于ＥＺ１工作站组，尤其是大片段基因在前两组中均能够被完整检测到。　结论采用ＱＩＡｃｕｂｅ工作站提取生物接触类检材检出率高，ＳＴＲ分型结果良好，可应用于法医物证实际案件检验。　关键词：法医遗传学；ＱＩＡｃｕｂｅ；ＥＺ１；硅珠法；生物接触类检材　中图分类号：ＤＦ７９５．２文献标识号：Ａ文章编号：１００８．３６５０（２０１５）０２．０１　１８．０４　作者简介：徐韩飞（１９８３一），女，浙江瑞安人，法医师，硕士，研究方向为法医物证学。Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｕｈａｎｆｅｉ０２１９０２３＠１６３．ｃｏｍ　２０１５年第４０卷第２期　徐韩飞等：ＱＩＡｃｕｂｅｄ’霎　工作站在生物接触类检材提取中的应用研究　・１１９・　生物接触类检材已成为法医物证ＤＮＡ检验的　在样本中加入５００ｇＬ左右体积（以没过载体为宜）　的Ｌｙｓｉｓ　Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｙｓｉｓ：ｌｍｏｌ／Ｌ　ＤＴＴ为１００：１），在恒温　常规检材，此类检材存在浓度低、易降解、易污染、　含有扩增抑制物和二次转移易损耗等问题，检出率　低。本研究拟通过ＱＩＡｃｕｂｅ小型工作站（以下简称　ＱＩＡｃｕｂｅ工作站）对生物接触类检材进行提取，并　与其他方法如ＥＺ１　Ａｄｖａｎｃｅｄ小型工作站（以下简称　ＥＺ１工作站）和手工硅珠法等进行比较，探讨在检验　混匀仪上１０００ｒ／ｍｉｎ，９５℃孵育裂解０．５ｈ后，吸取上清，　加入ｌＯｐＬ　６％硅珠混悬液，室温放置１５ｍｉｎ，间或　混匀，７０％冰乙醇洗涤３次，加入４０ｇＬ　ＴＥ在５６℃　恒温混匀仪上保温１５ｍｉｎ，离心转移洗脱得到ＤＮＡ　样本。　量日趋攀升的背景下如何快速高效地完成生物物证　样本消化时间和扩增模板体积的优化随机选　的ＤＮＡ检验。　１材料与方法　１．１材料　随机选取２０１４年４月份本实验室受理的各类接　触类生物检材９０份，来源均为鼠标、门把手和窗户　等汗潜指纹，室温保存。脱落细胞粘取膜、实物样本　纱线转移（利用干湿两步法将生物样本ＤＮＡ转移至　纱线）或棉签擦拭物各３０份。　１．２研究方法　１．２．１　主要钗器与试剂ＱＩＡｃｕｂｅ工作站、ＥＺ１工作站　（ＱＩＡＧＥＮ公司），Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ荧光定量ＰＣＲ仪（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ　公司），９７００　ＰＣＲ扩增仪、３５００ＸＬ型遗传分析仪、　ＧｅｎｅＭａｐｐｅｒ￣ＩＤ．Ｘ分析软件（ＡＢ公司），ＱＩＡａｍｐ￣　ＤＮＡ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ　Ｋｉｔ试剂盒（以下简称ＱＩＡａｍｐ试剂盒，　ＱＩＡＧＥＮ公司）、ＥＺ１　ＤＮＡ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ　Ｋｉｔ试剂盒（以　下简称ＥＺ１试剂盒，ＱＩＡＧＥＮ公司），６％硅珠混悬液　（Ｓｉｇｍａ公司），硅珠裂解ＬｙｓｉｓＢｕｆｆｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｌｅｒ￣Ｐｌｕｓ　ＰＣＲ试剂盒、Ｑｕａｎｔｉｉｆｌｅｒ￣ＤＵＯ定量试　剂盒（ＡＢ公司）。　１．２．２方法ＤＮＡ提取９０份生物接触类检材剪　取适量，平均分成三份，以消化裂解液没过样本载　体为宜。按照ＱＩＡｃｕｂｅ工作站Ｆｏｒｅｎｓｉｃｓ　Ｃａｓｅｗｏｒｋ　Ｓａｍｐｌｅｓ：Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ纯化程序（以下简称Ｐｕｒｉｉｆｃａ．　ｔｉｏｎ程序）在样本中加入ＡＴＬ缓冲液３００ｐ，Ｌ（含　２０ｇＬ　ＰＫ，ＱＩＡａｍｐ试剂盒自带），在恒温混匀仪　上１０００ｒｐｍ／ｍｉｎ，５６℃孵育裂解ｌｈ（或２ｈ），将洗　脱体积设置成４０ｐ．Ｌ，自动化提取纯化得到ＤＮＡ样　本；按照ＥＺ１工作站Ｔｒａｃｅ　ＴＤ纯化程序（以下简　称Ｔｒａｃｅ程序）在样本中加入Ｇ２液２００￣Ｌ（含１０　ＰＫ，ＥＺ１试剂盒自带），在恒温混匀仪上１０００ｒ／ｍｉｎ，　５６￣（２孵育裂解１ｈ，洗脱体积４０　，自动化提取纯化　得到ＤＮＡ样本；按照参考文献，采用改良硅珠法＿１］，　取２０份脱落细胞粘取膜为载体的生物接触类检材，　根据不同的消化时间（１、２ｈ）和模板量（１、２、　４ｐＬ）将每份样本分成６组，依照ＱＩＡｃｕｂｅ工作站　Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ纯化程序所得ＤＮＡ含量选择最佳消化时　间和模板扩增量。　ＰＣＲ扩增及产物检测采用Ｑｕａｎｔｉｉｆｌｅｒ￣ＤＵＯ定　量试剂盒在Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ荧光定量ＰＣＲ仪上进行提取　产物浓度定量。热循环参数参照试剂盒说明书。采　用Ｉｄｅｎｔｉｉｆｌｅｒ￣Ｐｌｕｓ　ＰＣＲ试剂盒在９７００　ＰＣＲ扩增仪上　进行复合扩增。扩增体系为１０　，其中反应液４ｐＬ，　引物２ｇＬ，模板量４ｇＬ（或１、２ｇＬ），热循环参数参　照试剂盒说明书。扩增产物经３５００ＸＬ型遗传分析仪　检测，ＧｅｎｅＭａｐｐｅｒ￣ＩＤ．Ｘ软件分析得到分型结果。　分型结果判断通过ＧｅｎｅＭａｐｐｅｒ￣ＩＤ．Ｘ软件分　析，获得９个ＳＴＲ基因座以上（包括９个基因分型），　ＲＦＵ值大于等于５０的样本判定为检出样本，９个基　因座以下且ＲＦＵ值小于５０的则判定为未检出样本『２］。　２结果　２．１　不同消化时间和扩增模板量所得ＤＮＡ浓度比较　随机选取的２０份脱落细胞粘取膜为载体的生物　接触类检材，按照获得９个ＳＴＲ基因座以上（包括　９个基因分型）且ＲＦＵ值大于等于５Ｏ的判定标准（含　混合分型图谱），对得到的９份检出样本进行统计分　析。表１显示，消化时问对ＤＮＡ浓度的影响差异　无统计学意义（尸＞０．０５　ｏ样本模板量为１ｌａＬ的生　物样本得到的ＤＮＡ浓度明显低于模板量为２ｇＬ和　４ｇＬ的生物样本（Ｐ＜０．０５）。样本模板量为２ｇＬ和　４ｇＬ的生物样本得到的ＤＮＡ浓度差异虽无统计学意　义（尸＞０．０５），但从ＳＴＲ分型效果来看，样本模板　量为４ＢＬ的检材对应的ＲＦＵ值及峰值均衡性均优于　２　Ｌ。经综合比较，本研究采用１ｈ消化时间和４　Ｌ　模板量对样本进行提取和扩增。　・１２０・　２０１５年第４Ｏ卷第２期　２．２不同转移载体ＱＩＡｃｕｂ提取ＤＮＡ浓度和ｓＴＲ分型　采用ＱＩＡｃｕｂｅ工作站提取的生物接触类检材中，　检出率为４４．４％，手工硅珠法组平均检出率为４３．２％，　而ＥＺ１工作站组平均检出率为２６．９％，明显低于前两　脱落细胞粘取膜组检出率达５６．７％，检出样本ＤＮＡ浓　度达（０．２６３±０．１００）ｎｇ／￣ｔＬ，实物纱线转移组检出率　组的检出率。采用ＱＩＡｃｕｂｅ工作站处理得到的检出样　本ＤＮＡ平均浓度明显高于ＥＺ１工作站组（尸＜０．０５），　达４６．７％，ＤＮＡ浓度达（０．１９５±０．０５８）ｎｇ／ｇＬ，棉签　经检测得到的ＳＴＲ分型ＲＦＵ值及峰值均衡性均优于　ＥＺ１工作站组，尤其大片段基因能够被完整检测到。　ＱＩＡｃｕｂｅ工作站组检出样本ＤＮＡ平均浓度与手工硅　珠法组相比，无统计学差异（尸＞０．０５　ｏ　在检材条件较差ＤＮＡ浓度偏低的样本中，有８　擦拭物组检出率达３０．０％，ＤＮＡ浓度达（０．１６８±０．０８４）　ｎｇ／￣ｔＬ，其平均检出率达４４．４％（见表２　ｏ结果显示，　脱落细胞粘取膜组和实物纱线转移组样本得到的ＤＮＡ　浓度普遍比棉签擦拭物组高。两组检出样本均获得较　好的ＳＴＲ分型结果。　２．３　ＱＩＡｃｕｂｅ、ＥＺ１与手工硅珠法比较　份样本经ＥＺ１工作站取的样本只有个别基因座检见，　等位基因缺失，ＲＦＵ值低，且大片段基因座抑制明　生物接触类检材一式三份，分别采用ＱＩＡｃｕｂｅ工　作站、ＥＺ１工作站和手工硅珠法提取ＤＮＡ，检出样　本的ＤＮＡ平均浓度见表３。ＱＩＡｃｕｂｅ工作站组平均　显。而同一样本经由ＱＩＡｃｕｂｅ工作站提取，扩增检　测得到的ＲＦＵ值约能达到２００，获得９～１２个基因座　的ＳＴＲ分型　表１　不同消化时间和不同模板量得到的ＤＮＡ浓度比较（ｎ＝２０）　Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｙｉｅｌｄ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｌａｔｅ（ｎ＝２０）　表３三种提取方式处理的样本检出率和ＤＮＡ浓度比较（ｎ＝３０）　Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｍａｓｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ（ｎ＝３０）　３讨论　窗户上的汗潜指纹等生物接触类检材提取与检验成　为日常检材，在实际工作中具有重要意义。生物接触　类检材，绝大部分是汗液斑，其ＤＮＡ来自脱落的上　随着法医物证ＤＮＡ检验在刑事案件中普及，勘　查人员对生物检材提取意识和犯罪人员反侦察意识　皮细胞中部分未角化细胞的细胞核ｌ３】。不同个体之间　存在汗液分泌多少、基础代谢率等生理差异，以及接　触的剧烈程度、接触时间、载体的物理属性和ＤＮＡ　都在提高，烟蒂、现场血、手套甚至猫眼上口香糖　等ＤＮＡ易于检出的生物物证难以提取得到，门把手、　２０１５年第４０卷第２期　徐韩飞等：ＱＩＡｃｕｂｅｄ，型工作站在生物接触类检材提取中的应用研究　・１２１‘　在载体上的遗留时间等因素可以导致遗留的ＤＮＡ量　差异Ｈ】。这类生物接触性检材占实验室日常检材的　柱和ＱＩＡａｍｐ。试剂盒相结合实现了生物接触类检材　高效、快捷的自动化ＤＮＡ提取。平均检出率达到　４４．４％，其中ＱＩＡｃｕｂｅ工作站提取的脱落细胞粘取膜　检出率达到５６．７％，与文献报道的微量检材提取成　功率相近［２　］。ＱＩＡｃｕｂｅ系统具有以下几个优势：（１）　取材量少，本研究中，每个检材均一式三份，如脱　５０％以上，但由于其本身ＤＮＡ浓度低，存在易降解、　易污染等问题，往往以未检见ＤＮＡ分型谱带告终。　针对生物接触类检材，传统ｃｈｅｌｅｘ１００法或磁珠　法提取为基础的检验方法ＤＮＡ检出率往往偏低。而　硅珠颗粒细、混悬液相对稳定，可以在高浓度的硫氰　落细胞粘取膜为载体的样本，只剪取１／３量的膜表面，　酸胍条件下单位体积内有更大的表面积与ＤＮＡ分子　结合，检验效率较ｃｈｅｌｅｘ　１　００和磁珠等颗粒介质高　】。　但硅珠颗粒在ＴＥ、水等胍盐以外的离子缓冲条件下，　即使高速离心，硅珠颗粒仍容易飘浮，若进入扩增系　统会降低ＤＮＡ扩增效率。另外，硅珠颗粒不溶于胍　有效解决传统生物接触类检材由于ＤＮＡ含量低导致　样本无法复核的窘境；（２）ＤＮＡ质量高，ＭｉｎＥｌｕｔｅ　柱以硅胶膜为基础，在单位体积有相对较大的表面积　与ＤＮＡ分子结合，效率高，得到高纯度ＤＮＡ；（３）　提取效率高，对样本进行５６％孵育裂解１ｈ后，在７５　盐缓冲液，离心后不易形成混悬液，提取过程消耗体　力，在日常检案中无法规模化，仅限于小范围使用。　以上特性使得传统硅珠法与工作站很难有机相结合，　不易形成自动化或半自动化。ＱＩＡｃｕｂｅ工作站最大的　ｍｉｎ内自动化完成一轮提取实验，一次性提取样本最　多可以达到１２个；（４）洗脱体积在２０～ｌＯＯｐ．Ｌ之间，　选择范围大，对于ＤＮＡ含量甚微的生物接触类检材　可以采用２０１．ｔＬ洗脱微体积，提高相对检测浓度；（５）　优势是，其ＱＩＡａｍｐ　ＭｉｎＥｌｕｔｅ　柱以硅胶膜为基础，　利用ＱＩＡａｍｐ试剂实现半自动化。在变性条件下用蛋　实现自动化，微量检材与常规生物检材可在同一平台　进行ＤＮＡ提取；（６）全封闭式提取仓，避免微量检　材相互之间交叉污染；（７）与ＥＺ１工作站相比，通　量增加一倍，耗材成本相对低廉。而ＱＩＡｃｕｂｅ工作　站的缺点则有以下两点：（１）上机前需要孵育、摆管、　白酶Ｋ裂解细胞并将ＤＮＡ释放，使ＤＮＡ在硫氰酸　胍缓冲液中结合到ＭｉｎＥｌｕｔｅ柱硅胶膜上，用洗涤液　洗去残留杂质，最后将ＤＮＡ从ＭｉｎＥｌｕｔｅ柱硅胶膜上　洗脱得到高纯度、浓缩的ＤＮＡ。提取阶段彻底摆脱　硅珠颗粒，ＤＮＡ扩增可以实现机械化加样，减少人　转管和配制缓冲液等，相当耗力；（２）去掉上机前准　备工作，整个程序运行时间为７５ｍｉｎ，与ＥＺ１工作　站的１７ｍｉｎ相比，时间上无优势。　为操作失误，提高实验室信息化。　本研究利用ＱＩＡｃｕｂｅ工作站及ＱＩＡａｍｐ　ＭｉｎＥｌｕｔｅ　参考文献　［１］杨电，刘超，徐曲毅，等．人体接触检材前处理方式对　磁珠法提取ＤＮＡ效果的影响［Ｊ］．法医学杂志，２０１　ｌ，　２６（５）：３９３—３９６．　Ｊ　Ｆｏｒｅｎｓｉｃ　Ｓｃｉ，２０００，４５（２）：３４５—３８０．　［４］张广峰，陈松，涂政，等．接触ＤＮＡ检验成功的影响　因素探讨［Ｊ］．刑事技术，２０１３（３）：９－１３．　［５］郑秀芬．法医ＤＮＡ分析［Ｍ］．北京：中国人民公安大学　出版社，２００２：３７—５９．　［２］杨电，刘超，徐曲毅，等．微量口腔脱落细胞检材的　ＤＮＡ检验［Ｊ］．法医学杂志，２００８，２４（２）：１２６—１２８．　１３］Ｆｒｅｇｅａｕ　Ｃ　Ｊ，Ｏｅｒｍａｉｎ　Ｏ，Ｆｏｕｎｒｅｙ　Ｒ　Ｍ．Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｅｎｈａｎ・　ｃｅｍｅｎｔ　ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｃｈｅ．　ｍｉｃａｌｓ　ｏｎ　ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ　ｐｒｏｆｉｌｅｒ　ｐｌｕｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｓｈｏｒｔ　ｔａｎｄｅｍ　［６］杨凡，梅善宗，李永宏，等．签字笔上附着的脱落上皮　细胞ＳＴＲ分型［Ｊ］．法医学杂志，２００８，２４（１）：３４．３６．　收稿日期：２０１４—０６—１６　ｒｅｐｅａｔ　ＤＮＡ　ｎａｌａｙｓｉｓ　ｏｆｆｌｅｓｈ　ｎｄ　ａａｇｅｄ　ｂｌｏｏｄｙ　ｉｆｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ＿Ｊ＿．　ｌ用本文格式　徐韩飞　誓范君　来＇富　Ｑ【Ａ　Ｅ１协－如　斟狲　啦戳鳞椭锄　鼬　翮　充啪ｌｊ　射　２ｏｌ５Ｉ一４０（２）：１１８－１２１