自体骨髓在兔腰椎横突间融合中诱导成骨的X线研究

ｌ５００　医药２０１２年５月第３４卷第１０期Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａ１　Ｊｏｕｒｎａ１．２０１２．Ｖ０１　３４　Ｍａｖ　Ｎｏ．１０　注意的是，肌酐不仅能够经肾小球滤过、亦可由近端肾小管分　综上所述，Ｃｙｓ—Ｃ与Ｓｃｒ、Ｃｃｒ有高度一致性，但在评价肾功　能方面敏感性更高，其可作为评价肾脏功能损害程度的首选　指标。　参考文献　１　Ｌｅｖｅｙ　Ａｓ，Ｂｏｓｃｈ　Ｊｐ，Ｌｅｗｉｓ　ＪＢ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｍｏｒｅ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｅｓｔｉｍａｔｅ　ｇｌｏｍｅｒｎｌｒ　ｆａｉｌｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｆｒｏｍ　ｓｅｒｕｍ　ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ：Ａ　ｎｅｗ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｅｑｕａ—　ｔｉｏｎ．Ｍｏｄｉｉｃａｔｆｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｅｔ　ｉｎ　Ｒｅｎａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｓｔｕｄｙ　Ｇｒｏｕｐ．Ａｎｎ　Ｉｎｔｅｒｎ　Ｍｅｄ，　１９９９，１３０：４６１－４７０．　泌，特别是当Ｓｃｒ明显升高时，肾小管分泌明显增多，因此，Ｃｃｒ　常过高地估算ＧＦＲ。　Ｃｙｓ—Ｃ属半胱氨酸蛋白酶抑制剂的胱氨素超家族成员，是　一种非糖基化的碱性蛋白产物，其编码基因为看家基因，由１２０　个氨基酸组成，分子质量为１３０　ｋＤａ，人体所有有核细胞均可产　生、且不受性别、年龄、体重、饮食、炎性反应等因素影响　］。动　物实验证实肾脏对Ｃｙｓ—Ｃ的清除与ｌ５　Ｃｒ—ＥＤＴＡ的清除很接　２　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｋｉｄｎｅｙ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ．Ｋ／ＤＯＱＩ　Ｃｌｉｎｌｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｆｏｒ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｋｉｄｎｅｙ　ｄｉｓｅａｓｅ：ｅｖａｌｕａｔｉＯ１１．ｅｌａｓｓｉｉｃａｔｉｆｏｎ．ａｎｄ　ｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ａｍ　Ｊ　Ｋｉｄｎｅｙ　Ｄｉｓ，２００２，３９：２２１－２２６．　近　。Ａｋｓｕｎ等”　研究表明Ｃｙｓ—Ｃ在体内的唯一代谢途径是通　过肾脏排泄、且在肾小管上皮细胞内完全降解，不被重吸收到　血液循环中，同时肾小管也不分泌Ｃｙｓ—Ｃ；血循环中Ｃｙｓ．Ｃ的浓　３　Ｔａｎ　ＧＤ，Ｌｅｗｉｓ　ＡＶ，Ｊａｍｅｓ　ＴＪ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ　ｏｆ　Ｃｙｓｔａｔｉｎ　Ｃ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　ｉｆｌｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｔｙｐｅ　ｌ　ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉ・　ｔｙ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅａｓｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｉｏｈｅｘｏｌ　ｃｌｅａｒｎｃｅ．ａ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｃａｒｅ，２００２，２５：２００４－２００９．　４　Ｔｅｎｓｔａｄ　Ｏ，Ｒｏａｌｄ　ＡＢ，Ｇｒｎｂｂ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｎａｌ　ｈａｎｄｉｎｇ　ｏｆ　ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｌｅｄ　ｈｕ—　度主要由肾小球率过滤决定。有研究显示，Ｃｙｓ　Ｃ是评价肾小　球率过滤的有效指标，其明显优于ＢＵＮ、Ｓｃｒ及Ｃｃｒ＿６　Ｊ。　研究显示血清Ｃｙｓ—Ｃ水平随肾功能损害程度的加重而升　高，高于对照组（Ｐ＜０．０５或＜０．Ｏ１），即使在肾功能不全代偿　期，Ｃｙｓ—Ｃ已经明显升高；相比而言，Ｓｃｒ测量值在肾功能不全代　偿期较对照组无明显升高。另外，本研究表明。肾功能损害患者　血清Ｃｙｓ－Ｃ、Ｓｃｒ测量值与ＧＦＲ水平均呈负相关（Ｐ＜０．０１），　且血清Ｃｙｓ—Ｃ与ＧＦＲ的相关性优于Ｓｃｒ。因此，Ｃｙｓ—Ｃ在评价肾　ｍａｌｌ　ｃｙｓｔａｔｉｎ　Ｃ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ．Ｓｃａｎｄ　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｌａｂ　Ｉｎｖｅｓｔ，１９９６，５６：４０９－４１４．　５　Ａｋｓｕｎ　ＳＡ，Ｏｚｍｅｎ　Ｄ，Ｏｚｍｅｎ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｂｅｔａ　２－ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　ａｎｄ　Ｃｙｓｔａｔｉｎ　Ｃ　ｉｎ　ｔｙｐｅ　２　ｄｉａｂｅｔｅｓ：ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｅｘｐｅｌｉｎ　Ｅｎｄｏ—　ｃｒｉｎｏｌ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００４，１１２：１９５－２００．　６　Ｒａｎｄｅｒｓ　Ｅ，Ｅｄａｎｄｓｅｎ　ＥＬ，Ｐｅｄｅｒｓｅｎ　ＯＬ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｒｕｍ　ｅｙｓｔａｔｉｎ　Ｃ　ａｓ　ａｎ　ｅｎ．　ｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｐａｒａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｎａｌ　ｔｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｔｏ　ｍｏｄ—　ｅｒａｔｅｌｙ　ｉｍｐａｉｒｅｄ　ｋｉｄｎｅｙ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０００，５４：２０３－２０９．　功能早期损害方面明显优于Ｓｃｒ，与Ｒａｎｄｅｒｓ等　的肾功能正常　或轻度异常时，Ｃｙｓｔａｔｉｎ　Ｃ评定ＧＦＲ的效果优于Ｓｃｒ相一致。　（收稿日期：２０１１—０６—２１）　●　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－７３８６．２０１２．１０．０３０　・论著・　自体骨髓在兔腰椎横突问融合中诱导成骨的　Ｘ线研究　苏曼罡　刘志国　夏铁成【摘要】　目的都建学　张建鹏　骨骼成熟的中国白兔　研究自体骨髓在兔腰椎横突间融合中的诱导成骨作用。方法２４只，行双侧腰５—６椎体横突间植骨融合。试验组除植入髂骨外，取２　ｍｌ自体骨髓植入融合区。不同时　期处死动物．８、１２周的脊柱标本通过摄正位ｘ线片观察融合区骨块生长情况。结果ｘ线片测定融合率　显示：实验组ｌ２只动物中，８只获得牢固融合（６６．６％）；对照组８只动物中３只获得牢固融合（３７．５％）。　结论兔腰椎横突间融合模型中，自体骨髓是一种有效的骨移植添加物，可在应用有限自体髂骨植骨的情　况下．获得更好的融合效果。　【关键词】脊柱融合；骨髓移植；免；骨移植替代物　【中图分类号】　Ｒ　６８３　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】　１００２—７３８６（２０１２）ｌ０—１５００—０２　脊柱融合术是脊柱外科的基本手术之一，后外侧横突问、　小关节突间融合是目前常用的方法，但假关节发生率较高。自　体骨髓内含有骨髓基质干细胞，具有成骨能力。本实验通过研　北大学附属医院实验中心提供，清洁级动物，普通环境，单笼喂　养，饲喂质量合格的全价饲料，雌雄不限，体重３—３．５　ｋｇ，随机　分为实验组（ｎ：１４）和对照组（ｎ＝１０）。腹腔内注射硫贲妥　钠（３０　ｍｒ，／ｋｇ），如麻醉效果差，加用０．５％普鲁卡因局部浸润。　腰５、６棘突为中心做后正中切口，自椎旁肌外侧向前分离肌　肉，显露双侧５、６腰椎横突，去除后方骨皮质，取一侧髂骨约１　ｇ　修剪成约０．３　ｅｍ　骨块，每侧横突间植入约０．５　ｇ。实验组从另　一究自体骨髓在腰椎横突间融合中诱导成骨的作用，探讨其作为　骨移植添加物的效果，为临床应用提供参考依据。　１材料与方法　１．１动物分组与手术健康、骨骼成熟中国白兔２４只，由河　侧髂骨一点穿刺抽取２　ｍｌ骨髓，抽吸前注射器内取０．１　ｍｌ　作者单位：０７１０００河北省保定市第一医院骨科（苏曼罡、夏铁成、　郝建学、张建鹏）；河北省保定市第一中心医院骨科（刘志国）　肝素钠液，２　ｍｌ与髂骨块充分混匀放置数分钟，每侧融合区各　植入０．５　ｇ自体髂骨和１　ｍｌ自体骨髓的混合物。术后单笼喂　医药２０１２年５月第３４卷第　期Ｈｅｂｅｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｍａｌ，２０１２，Ｖｏｌ　３４　Ｍａｙ　Ｎｏ．１０　１５０１　养，未用外固定。术后４周每组各处死２只动物，８、１２周，实验　组和对照组每批分别处死６、４只动物。脊柱标本立即放入　４℃，１０％甲醛液固定３—４　ｄ。　塑形改造的表现，表明融合骨块进入塑形改造期，手工检测证　实为牢固融合（图１）。对照组多表现为横突问无骨组织生长　（图２），或融合骨块细小，未充满横突间。融合的标本显示融　合骨块较小，外侧骨皮质较薄，也可见骨块塑形改造的表现。　１２周时，实验组动物标本两横突间可见到成熟的融合骨块（图　３），密度较高，边缘皮质骨光滑，表明塑形改造已完成。对照组　不融合标本表现为两横突间无融合骨块生长或较细小的融合　骨块或一侧横突间新骨形成，另侧无新骨（图４），骨块密度较　１．２观察指标再将８、１２周的标本拍摄前后位ｘ线片，管球　距标本约１００　ｃｍ，观察融合区骨块生长情况。每个标本也经过　两位盲审医师按相同标准判断融合率，只有两位医师均认为标　本的ｘ线片牢固融合时，此标本才能被确定为牢固融合。如果　有一位或者两位认为融合不牢固，该标本即被确定不融合。　２结果　高，边缘光滑，表明骨块已成熟。少数融合的标本两横突间也　可见成熟的融合骨块，但体积相对较小。Ｘ线片测定融合率显　８周时，实验组动物标本Ｘ线片即可见到较大的融合骨块　充满两横突之间（图１），骨块外侧可见皮质骨，内侧可见连续　的骨小梁连接两横突。某些Ｘ线片的皮质骨边缘已较光滑，有　示：实验组１２只动物中，８只获得牢固融合（６６．６％）；对照组８　只动物中３只获得牢固融合（３７．５％）。　图１　新生骨充满两横突之　图２　两横突之间有不同宽　图３移植物全部补吸收，横　图４一侧横突间新骨形　间，手工检测全部证　度的骨组织连接，手　突间无新生骨，手工检　成，另一侧无新骨，　实为牢固融合　工检测为牢固融合　测为不融合　手工检测为不融合　３讨论　目前，国内外许多学者报道了临床应用自体骨髓移植治疗　骨折延迟愈合、不愈合、骨缺损和骨囊肿，涉及到胫骨、股骨、肱　骨、手舟骨等，效果较好　。　本实验证实，自体骨髓在兔腰椎横突间融合模型中，是一　种有效可靠的骨移植添加物，在应用较少自体髂骨的情况下，　融合效果优于单纯应用自体髂骨移植，主要表现为融合时间缩　短，骨量明显增加，横突间融合牢固，而且来源充足，获取方便，　可以反复抽取，无传染疾病、免疫排斥反应的风险，明显减少供　脊柱融合术是脊柱外科的基本手术之一，后外侧横突间、　小关节突间融合是目前常用的方法，但此融合区处于张力侧，　同时脊柱运动时，其运动幅度较大。由于以上不利因素，假关　节形成一直是其首要并发症，据报道为２０％一５０％…。自体髂　骨是较理想的骨移植物，具有成骨所需要的骨诱导和骨传导作　用，但其来源有限，特别对于假关节形成需二次手术、需多节段　融合及小儿脊柱侧弯矫形的患者。而且，取骨区并发症较多，　发生率６％一２５％。目前，有多种骨移植材料用于脊柱融合，研　究较多的是具有骨诱导作用的ＢＭＰ家族同各种支架或载体形　成的复合物，然而其费用昂贵并可能形成异位骨化，而且某些　临床实验性应用显示其效果等同于自体髂骨移植。近些年，随　着同种异体骨制备、贮存、灭菌方法的提高，其抗原性和感染率　逐渐降低，融合效果也日益提高…。但仍然存在交叉感染疾　病、免疫排斥反应的风险。而且，Ｂｕｔｔｅｒｍａｎ等　发现，胸腰椎　后路融合应该使用自体髂骨移植　。目前研究较多的骨髓基　质干细胞体外培养扩增后，复合载体用于脊柱融合，成骨作用　强，融合率高。但目前仅限于实验研究，而且对技术设备要求　高，细胞培养时间较长，只能手术植入，不能经皮注射。　自体骨髓内的红骨髓含有造血细胞和骨髓基质，骨髓基质　中含多能干细胞，Ｏｗｅｎ　称之为骨髓基质干细胞，其可以在无　骨区并发症，减少患者痛苦，降低治疗费用。是有效、安全、经　济的移植添加物。　参考文献　１　Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ　ＧＥ，Ｃｌａｙｔｏｎ　ＲＰ，Ｃｏｌｅ　ＤＪ，ｅｔ　ａ１．Ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ－１（ＢＭＰ－　７）ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆｔｉｂｉａｌ　ｎｏｎｕｎｉｏｎｓ．ＪＢＪＳ，２００１，８３：１５Ｉ－１５８．　２　Ｂｕｔｔｅｒｍａｎ　ＧＲ，Ｇｌａｚｅｒ　ＰＡ，Ｂｒａｄｆｏｒｄ　ＤＳ．Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｐｉｎｅ．Ｃｌｉｎ　Ｏｒｔｈｏｐ，１９９６，７５：３２４．　３　Ｏｗｅｎ　ＭＥ．Ｌｉｎｅａｇｅ　ｆ　ｏｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｎ：Ｐｅｃｋ　ＷＡ，ｅｄｓ．Ｂｏｎｅ　ａｎｄ　Ｍｉｎｅｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８４．１－２５．　４　Ｔｕｒｋｓｅｎ　Ｋ，Ａｕｂｉｎ　ＪＥ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｉｍｍｕｎｏｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｅｎｒｉｃｈ—　ｍｅｎｔｏｆｔｏｗ　ｃｌａｓｓｅｓ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ，１９９１，１１４：３７３—　３８４．　诱导下骨化，称为确定性骨源性前体细胞（ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ　ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ　ｃｅｌｌｓ，ＤＯＰＣ），也称为骨源性干细胞（ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ　ｓｔｅｍ　５王恒冰，王继孟，郭宗远．自体骨髓移植治疗ｄｘＪＬ孤立性骨囊肿的初　步观察．中华ｄ＇ＪＵ＇＂ｌ科杂志，２００２，２３：６８．　６徐耀增，王晓东，董天华．自体骨髓经皮注射治疗骨延迟愈合和骨不　连．中国矫形外科杂志，２００３，１　１：５８４－５８６．　７　Ｃｏｎｎｏｌｌｙ　ＪＦ，Ｇｕｓｅ　Ｒ，Ｔｉｅｄｅｍａｎ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ　ｍａｒｒｏｗ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　ｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｉｂａｌ　ｎｏｎｕｎｉｏｕｓ．Ｃｌｉｎ　Ｏｒｔｈｏｐ，１９９１，　２６６：２５９－２７０．　ｃｅｌｌｓ）。Ｔｕｒｋｓｅｎ等　等证明，ＤＯＰＣ体外培养逐步分化成骨源　性干细胞一骨祖细胞一前成骨细胞一成骨细胞一骨细胞。　（收稿日期：２０１１—１１—１０）